RhoA特异性RNA干扰对HSC-T6细胞外基质表达的影响

发布时间：2020-11-17 13:11

　　 目的:探讨针对大鼠RhoA基因的RNA干扰技术对HSC-T6 RhoA、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型前胶原(Procollagen typeⅢ,PCⅢ)、透明质酸(Hyaluronic acid ,HA)及层粘连蛋白(Laminin,LN)的影响。 方法:将阴性质粒(HK-A质粒)及大鼠RhoA基因特异性siRNA表达质粒(Rat1质粒、Rat2质粒)转染至大鼠肝星状细胞HSC-T6。将细胞分组如下:A组(正常培养)、B组(转染HK-A质粒)、C组(转染Rat1质粒)、D组(转染Rat2质粒)。用RT-PCR技术检测细胞RhoA、ColⅠ、PCⅢmRNA的表达。用ELISA方法检测培养上清中HA及LN的含量。 结果:Rat1质粒所介导的RNAi技术能有效抑制大鼠肝星状细胞HSC-T6 RhoA、PCⅢ、ColⅠmRNA表达量及培养上清中HA及LN生成量。与A组相比,C组RhoA、PCⅢmRNA表达量下降(p﹤0.05),ColⅠmRNA、HA及LN表达量也显著下降(p﹤0.01),五者抑制率分别为43.77%、43.68%、71.00%、59.53%、93.08%。而B组、D组与A组相比,表达量均无统计学差异(p﹥0.05)。 结论:以RhoA为干预点,Rat1质粒所介导的RNAi技术能有效抑制大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞外基质的生成,为体内的进一步研究提供了实验基础。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R575.2
【部分图文】：

生长状态差，质粒转染效率约 30％（见图 1、图 2、图 3、图 4）。图 1 普通光学显微镜下所见 A 组细胞（正常培养） ×200图 2 荧光显微镜下所见 B 组细胞（转染 HK-A 质粒） ×200

生长状态差，质粒转染效率约 30％（见图 1、图 2、图 3、图 4）。图 1 普通光学显微镜下所见 A 组细胞（正常培养） ×200图 2 荧光显微镜下所见 B 组细胞（转染 HK-A 质粒） ×200

备注：从右至左泳道分Marker （ 从 上 到100bp 、 200bp 、 30400bp、500bp、600A 组、B 组、C 组、样本。内参Ⅰ片段为 17RhoA 片段为 347bp
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本文编号：2887532