骨髓间充质干细胞移植修复损伤大鼠胃黏膜的实验研究

发布时间：2020-12-03 03:12

　　研究背景:骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）是骨髓中一种非造血类的干细胞。近些年来的研究发现,间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）由于具有多向分化潜能、低免疫原性和易于体外扩增等特点,受到医学应用领域的广泛关注。应用骨髓MSCs移植进行细胞替代治疗,目前已被广泛应用于缺血或损伤性疾病以及器官移植、抗免疫排斥反应等研究领域,并取得了初步效果。因此,干细胞替代治疗有望成为临床上一种新的治疗手段。目的:体外培养和扩增的骨髓间充质干细胞对损伤胃黏膜的修复作用及其机制研究。方法:1、分别采用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法体外培养和扩增Wistar大鼠的骨髓MSCs,应用MTT方法比较两种方法下骨髓MSCs的自然生长曲线,流式细胞仪检测骨髓MSCs表面标志物,对培养、纯化的骨髓MSCs进行鉴定。2、以活体染料羟基荧光素乙酰乙酸（5,6-carboxyfluoresceindiacetate succinimidyl ester,CFDA SE）体外标记骨髓MSCs,荧光显微镜下、488nm波长激发光... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

胃，髓MSCs第2代(X200)

军医进修学院博十学位论文结果一、原代和传代培养的大鼠骨髓MSCs的形态学观察(见图1.1一L3)(一)全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓MSCs从大鼠抽取骨髓制成细胞悬液，刚开始接种于培养瓶时，夹杂大量的造血干细胞、红细胞，由于造血干细胞、红细胞不贴壁，因此可以根据此特性通过换液逐渐将其清除。于细胞生长48小时后可见细胞30%贴壁，贴壁的细胞形态各异，呈圆形、短棒形或多角形，经第一次换液后，细胞增殖加快，其增殖速度明显快于密度梯度离心法。5天时可见有50%细胞贴壁，7一10天细胞达70%一80%融合，逐渐舒展呈现多种形态，并可见细胞克隆的形成。细胞以多角和长梭形为主

髓MSCS第3代(x100)骨髓MSC，生长曲线髓贴壁法和密度梯度离心法两者在细胞接种后第1一3天细，为细胞生长的潜伏期，3天后细胞生长加速，有一快速生生长期，于7一9天时，细胞数达最高值，为细胞生长平台期速度减慢。全骨髓贴壁法所获骨髓间充质干细胞第1天OD梯度离心法;细胞从第3天起增殖加快，进入指数增长期，度梯度离心法;至第9天，细胞增殖明显减慢进入平台期。培养开始3天时，密度梯度离心法生长速度明显高于全骨髓1)，此后两种方法下细胞生长速度无明显差异(P>0.05)。(见表1.1MTT法骨髓MSCs生长曲线测定结果(OD值)(万士S)


本文编号：2895898