CPA1、PRSS1基因突变检测及其与慢性胰腺炎相关性研究
发布时间：2020-12-21 16:13
慢性胰腺炎（chronic pancreatitis,CP）是一种胰腺实质性病变,最终可致胰腺内外分泌功能不全。我国CP发病率较低,但近年来有明显上升的趋势,因此明确CP发病机制将有助于对其进行早期诊断及治疗。如今医学、分子生物学和生物信息学等交叉学科不断在发展,已有研究证实CP是由于环境因素和遗传因素联合作用所致。本研究包括两部分内容,分别探讨了四川地区汉族人群慢性胰腺炎CPA1和PRSS1基因突变情况以及CPA1和PRSS1基因与慢性胰腺炎的相关性。本研究在中国四川地区汉族人群中筛查CPA1和PRSS1基因突变,并筛选CPA1和PRSS1基因上标签SNPs位点,以探索CPA1和PRSS1基因与中国四川地区汉族人群CP发病的相关性。运用Sanger直接测序法进行CPA1和PRSS1基因全部外显子区域目的片段的测序。将测序结果通过UCSC数据库进行在线比对并核准,同时将正常对照组的结果进行同步比对以明确突变的性质（SNP或新发现的突变）,并通过SIFT网站预测突变位点的性质,通过千人基因组计划数据库查询突变位点是否为新发现突变。同时通过Haploview软件挑选CPA1和PRSS1基因...
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CP相关基因突变机制示意图
年 11 月期间在电子科技大学附属医院·四川省人民医院及电子科技大学附属医院·四川省人民医院崇州分院招募的志愿者，其中慢性胰腺炎组共 192 例，全部患者均排除肿瘤、高血压、糖尿病等代谢性疾病、自身免疫性疾病等基础疾病。同期收集健康体检者 240 例为对照组，病例组与对照组年龄、性别相匹配且均无亲缘关系。该研究已获得电子科技大学附属医院·四川省人民医院伦理委员会批准，并在研究前受试者均同意并签订了知情同意书。2.1.1.1 慢性胰腺炎病例组的纳入标准依据 2014 年中华医学会外科学分会胰腺外科学组制订的《慢性胰腺炎诊治指南》[69]，慢性胰腺炎病例组的纳入标准如下（下列任何一项）：a. 胰管结石，见图 2-2（a）；b. 胰腺多发性钙化，见图 2-2（b）；c. 主胰管和分支胰管不规则扩张，见图 2-2（c）；d. 6 个月内有 2 次或 2 次以上的胰腺外分泌功能检测结果异常；e. 血清和尿胰酶水平异常。
00r/min 离心 10min，将上清液转移到另一支新的已编好号的离心管。向装有的新离线管中分别加入 4ml 异丙醇溶液，颠倒混匀 10 至 15 次，3000r/min 离min 后，轻轻去掉上清。再向离心管中各加入 2ml 75%乙醇溶液，稍作摇晃00r/min 离心 10min，轻轻去掉上清。将离心管室温干燥 1-2h 待乙醇充分挥发入 200μl-300μl 灭菌蒸馏水溶解备用，-20℃保存。（3）测定DNA浓度与纯度：吸取1μl提取完毕的样本DNA溶液，用Nano D00 分光光度计检测样本的 DNA 浓度与纯度。确定实验用 DNA 样本浓度 0nm/280nm 比值在 1.6-1.8 之间，浓度大于 500ng/μl，则说明所提取 DNA 样本达标，然后将样本 DNA 整理后置于-20℃冰箱，保存备用。1.3 CPA1 和 PRSS1 基因测序.3.1 基因序列数据CPA1 基因位于 7q32.2，全长约 7.738kb，位于 CPAS 和 CEP41 基因之间， 10 个外显子。（见图 2-3）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Prognostic value of inflammation-based markers in patients with pancreatic cancer administered gemcitabine and erlotinib[J]. Jae Min Lee,Hong Sik Lee,Jong Jin Hyun,Hyuk Soon Choi,Eun Sun Kim,Bora Keum,Yeon Seok Seo,Yoon Tae Jeen,Hoon Jai Chun,Soon Ho Um,Chang Duck Kim. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(07)
[2]北京协和医院346例慢性胰腺炎人口学特征、病因变迁及临床特点[J]. 赖雅敏,郭涛,丁辉,吕红,杨红,杨爱明,李景南,韦婷,王辉,张岳,钱家鸣. 协和医学杂志. 2015(02)
[3]Genetics of acute and chronic pancreatitis: An update[J]. VV Ravi Kanth,D Nageshwar Reddy. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2014(04)
[4]慢性胰腺炎与胰腺癌相互关系的研究进展[J]. 张立华. 实用医院临床杂志. 2013(04)
[5]慢性胰腺炎的病因和发病机制[J]. 王兴鹏,张汝玲. 中国实用外科杂志. 2011(09)
[6]一个遗传性胰腺炎家系中新发现的胰蛋白酶原基因突变[J]. 刘奇才,程祖建,杨艳,欧启水. 遗传. 2007(09)
[7]胆源性和酒精性慢性胰腺炎临床特点分析[J]. 丁震,刘俊,侯晓华. 胃肠病学. 2007(08)
[8]单核苷酸多态性检测方法的研究进展[J]. 汪维鹏,倪坤仪,周国华. 遗传. 2006(01)
[9]慢性胰腺炎诊断与治疗临床研究(附262例分析)[J]. 王洛伟,李兆申,方裕强,高俊,许国铭,孙振兴. 解放军医学杂志. 2002(09)
[10]慢性胰腺炎的病因[J]. 钱家鸣. 胃肠病学. 2001(03)
本文编号：2930119
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CP相关基因突变机制示意图
年 11 月期间在电子科技大学附属医院·四川省人民医院及电子科技大学附属医院·四川省人民医院崇州分院招募的志愿者，其中慢性胰腺炎组共 192 例，全部患者均排除肿瘤、高血压、糖尿病等代谢性疾病、自身免疫性疾病等基础疾病。同期收集健康体检者 240 例为对照组，病例组与对照组年龄、性别相匹配且均无亲缘关系。该研究已获得电子科技大学附属医院·四川省人民医院伦理委员会批准，并在研究前受试者均同意并签订了知情同意书。2.1.1.1 慢性胰腺炎病例组的纳入标准依据 2014 年中华医学会外科学分会胰腺外科学组制订的《慢性胰腺炎诊治指南》[69]，慢性胰腺炎病例组的纳入标准如下（下列任何一项）：a. 胰管结石，见图 2-2（a）；b. 胰腺多发性钙化，见图 2-2（b）；c. 主胰管和分支胰管不规则扩张，见图 2-2（c）；d. 6 个月内有 2 次或 2 次以上的胰腺外分泌功能检测结果异常；e. 血清和尿胰酶水平异常。
00r/min 离心 10min，将上清液转移到另一支新的已编好号的离心管。向装有的新离线管中分别加入 4ml 异丙醇溶液，颠倒混匀 10 至 15 次，3000r/min 离min 后，轻轻去掉上清。再向离心管中各加入 2ml 75%乙醇溶液，稍作摇晃00r/min 离心 10min，轻轻去掉上清。将离心管室温干燥 1-2h 待乙醇充分挥发入 200μl-300μl 灭菌蒸馏水溶解备用，-20℃保存。（3）测定DNA浓度与纯度：吸取1μl提取完毕的样本DNA溶液，用Nano D00 分光光度计检测样本的 DNA 浓度与纯度。确定实验用 DNA 样本浓度 0nm/280nm 比值在 1.6-1.8 之间，浓度大于 500ng/μl，则说明所提取 DNA 样本达标，然后将样本 DNA 整理后置于-20℃冰箱，保存备用。1.3 CPA1 和 PRSS1 基因测序.3.1 基因序列数据CPA1 基因位于 7q32.2，全长约 7.738kb，位于 CPAS 和 CEP41 基因之间， 10 个外显子。（见图 2-3）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Prognostic value of inflammation-based markers in patients with pancreatic cancer administered gemcitabine and erlotinib[J]. Jae Min Lee,Hong Sik Lee,Jong Jin Hyun,Hyuk Soon Choi,Eun Sun Kim,Bora Keum,Yeon Seok Seo,Yoon Tae Jeen,Hoon Jai Chun,Soon Ho Um,Chang Duck Kim. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(07)
[2]北京协和医院346例慢性胰腺炎人口学特征、病因变迁及临床特点[J]. 赖雅敏,郭涛,丁辉,吕红,杨红,杨爱明,李景南,韦婷,王辉,张岳,钱家鸣. 协和医学杂志. 2015(02)
[3]Genetics of acute and chronic pancreatitis: An update[J]. VV Ravi Kanth,D Nageshwar Reddy. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2014(04)
[4]慢性胰腺炎与胰腺癌相互关系的研究进展[J]. 张立华. 实用医院临床杂志. 2013(04)
[5]慢性胰腺炎的病因和发病机制[J]. 王兴鹏,张汝玲. 中国实用外科杂志. 2011(09)
[6]一个遗传性胰腺炎家系中新发现的胰蛋白酶原基因突变[J]. 刘奇才,程祖建,杨艳,欧启水. 遗传. 2007(09)
[7]胆源性和酒精性慢性胰腺炎临床特点分析[J]. 丁震,刘俊,侯晓华. 胃肠病学. 2007(08)
[8]单核苷酸多态性检测方法的研究进展[J]. 汪维鹏,倪坤仪,周国华. 遗传. 2006(01)
[9]慢性胰腺炎诊断与治疗临床研究(附262例分析)[J]. 王洛伟,李兆申,方裕强,高俊,许国铭,孙振兴. 解放军医学杂志. 2002(09)
[10]慢性胰腺炎的病因[J]. 钱家鸣. 胃肠病学. 2001(03)
本文编号：2930119
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