小鼠肝核苷酸池、核酸池的特征及其与纤维化的作用关系
发布时间：2020-12-22 12:28
肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理基础,是进一步向肝硬化发展的中心环节,有关肝纤维化机理方面的研究无论是在细胞水平上还是在大分子水平上都已经相当深入,但是在对于细胞代谢和生命活动有着重要影响的小分子及其与大分子作用关系方面的关注甚少,尤其是对于核苷酸池的性质、动力学特征以及它与基因表达和纤维化进程的关系的研究尚属空白。本研究探索了纤维化过程中核苷酸池的性质、特点和动力学特征及其与病理过程和差异表达基因间的关系,同时也为纤维化及外源核苷酸缓解纤维化进程的作用机理提供了新的认识。采用CCl4诱导的方法建立肝纤维化小鼠模型,肝纤维化进程的衡量指标为AST、ALT酶活性和肝组织切片观测。采用HPLC法系统地测定了纤维化过程中CCl4诱导的小鼠和正常小鼠细胞内的核苷酸含量。有关CCl4诱导的纤维化小鼠的核酸池(代表性差异表达基因)数据是从Ensemb1、BioGPS数据库和文献中收集整理的。采用荧光定量PCR技术测定了核苷酸三个代谢途径的关键酶基因和7个小鼠肝纤维化相关基因的表达水平。一磷酸核苷酸(NMP)的含量,AST/ALT的比值以及代表性差异表达基因数据用来分析核苷酸池、核酸池和纤维化进程三...
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 肝纤维化综述
1.2 核苷酸池综述
1.2.1 核苷酸的概述
1.2.2 核苷酸的种类
1.2.3 核苷酸的功能
1.2.4 核苷酸池的研究进展
1.2.5 核苷酸代谢
1.2.5.1 核苷酸的合成代谢
1.2.5.1.1 嘌呤核苷酸的合成代谢
1.2.5.1.2 嘌呤核苷酸的挽救途径
1.2.5.1.3 嘧啶核苷酸的合成代谢
1.2.5.1.4 嘧啶核苷酸的挽救途径
1.2.5.2 核苷酸的分解代谢
1.2.5.2.1 嘌呤核苷酸的分解代谢
1.2.5.2.2 嘧啶核苷酸的分解代谢
1.3 讨论
第2章 肝损伤过程中核酸池的变化
2.1 肝损伤过程中表达变化的基因
2.2 肝损伤过程中基因表达变化的总结
2.2.1 肝损伤过程中表达变化的基因
2.2.1.1 肝损伤过程中表达上调的基因
2.2.1.2 肝损伤过程中表达下调的基因
2.2.2 肝损伤不同时期基因表达变化的特征
4诱导的肝纤维化小鼠核酸池表达变化的特征"> 2.2.3 CCl4诱导的肝纤维化小鼠核酸池表达变化的特征
2.3 讨论
第3章 肝纤维化过程中核苷酸池的变化
3.1 材料与方法
3.1.1 实验动物
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 动物模型
3.1.5 血浆样品制备
3.1.6 肝脏切片制备
3.1.7 肝脏样品制备
3.1.8 色谱标准液配制
3.1.9 色谱条件
3.1.10 统计处理
3.2 实验结果
3.2.1 小鼠日常观察
3.2.2 血浆转氨酶检测
3.2.2.1 AST检测结果
3.2.2.2 ALT检测结果
3.2.2.3 AST/ALT比值
3.2.3 组织切片观测
3.2.4 核苷酸池检测
3.2.4.1 标准曲线
3.2.4.2 色谱实验结果
3.2.4.3 各类核苷酸含量的变化
3.2.4.4 NMP、NDP、NTP含量的变化
3.2.4.5 TAN、TGN、TUN、TCN含量的变化
3.2.4.6 核苷酸总量的变化
3.3 讨论
第4章 核苷酸代谢关键酶基因及纤维化相关重要基因的表达水平研究
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.1.4 肝脏RNA样品制备
4.1.5 反转录过程
4.1.6 荧光定量条件
4.1.7 统计处理
4.2 实验结果
4.2.0 RNA样品质量
4.2.1 小鼠核苷酸代谢途径关键酶基因表达水平测定结果
4.2.2 小鼠肝纤维化差异表达基因表达水平测定结果
4.3 结果分析
4.3.1 小鼠核苷酸代谢途径关键酶基因相对表达水平结果分析
4.3.1.1 HGPRT相对表达水平分析
4.3.1.2 Aprt相对表达水平分析
4.3.1.3 Cps1相对表达水平分析
4.3.1.4 Dpyd表达水平分析
4.3.1.5 Prps2相对表达水平分析
4.3.2 小鼠肝纤维化相关基因相对表达水平结果分析
4.3.2.1 Mmp3相对表达水平分析
4.3.2.2 Co16a1相对表达水平分析
4.3.2.3 Egr1相对表达水平分析
4.3.2.4 Mapk7相对表达水平分析
4.3.2.5 Hnfla相对表达水平分析
4.3.2.6 Cyp2a4相对表达水平分析
4.3.2.7 Cyp2j9相对表达水平分析
4.4 讨论
第5章 核苷酸池、核酸池及纤维化进程相关性研究
5.1 核苷酸池内核苷酸间的相关性分析
5.1.1 NMP、NDP、NTP间的相关性
5.1.2 AMP、GMP、UMP、CMP间的相关性
5.2 核苷酸池与纤维化进程相关性分析
5.3 核苷酸池与核酸池相关性分析
5.3.1 核苷酸池与Aprt表达水平相关性分析
5.3.2 核苷酸池与核酸池相关性分析
5.4 讨论
第6章 全文总结
附录
参考文献
在读期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用基因芯片对人肝纤维化相关基因的筛查[J]. 罗新华,杨勤,张权,程明亮. 世界华人消化杂志. 2008(14)
[2]Serial changes in expression of functionally clustered genes in progression of liver fibrosis in hepatitis C patients[J]. Yoshiyuki Takahara,Mitsuo Takahashi,Hirotaka Wagatsuma,Maiko Mori,Akihiro Tamori,Susumu Shiomi,Shuhei Nishiguchi. World Journal of Gastroenterology. 2008(13)
[3]大鼠肝纤维化模型肝组织及血清中基质金属蛋白酶抑制因子-1的动态变化[J]. 田力,陈奎生,蔡庆春,毕蕾,高圆,王凤莉,李娜,王锦玉. 药品评价. 2007(05)
[4]TGF-β1、BMP-7 mRNA在实验性肝纤维化中的表达及意义[J]. 黄宁,曾令兰,李淑莉,苏凤菊. 微循环学杂志. 2007(03)
[5]Dynamic expression of extracellular signal-regulated kinase in rat liver tissue during hepatic fibrogenesis[J]. Xiao-Lan Zhang, Jin-Ming Liu, Chang-Chun Yang, Yi-Lin Zheng, Li Liu, Zhan-Kui Wang, Hui-Qing Jiang, Department of Gastroenterology, the Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(39)
[6]肥大细胞及蛋白酶激活受体-2在大鼠实验性肝纤维化中的变化[J]. 徐可树,李琪,周霞. 中华肝脏病杂志. 2006(10)
[7]Expression and location of Smad2,4 mRNAs during and after liver fibrogenesis of rats[J]. Yang Liu, Hai-Feng Zou, Hua-Feng Xu, Ping Lin, Xiao-Guang Yu, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China Li-Feng Wang, Department of Pathology of the First Clinical College, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China Xiao-Yan Song, Master degree student of Department of Pathology of Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China Hai-Hong Zheng, Department of Experimental Animal of the Second Clinical College, Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(10)
[8]肝纤维化基质金属蛋白酶-26/基质金属蛋白酶抑制因子-1mRNA的表达[J]. 邹海峰,刘洋,徐华锋,林平,赵丹丹,吴进荣,刘鑫,于晓光. 中华肝脏病杂志. 2006(02)
[9]Nitric oxide synthase and heme oxygenase expressions in human liver cirrhosis[J]. BeatriceJGoh,HoonEngKhoo,BeeTeeTan,KangHoeLee. World Journal of Gastroenterology. 2006(04)
[10]四氯化碳损伤小鼠肝脏基因表达谱的变化[J]. 陈勇,程明,夏启松,杜鹏. 药学学报. 2005(10)
本文编号：2931770
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 肝纤维化综述
1.2 核苷酸池综述
1.2.1 核苷酸的概述
1.2.2 核苷酸的种类
1.2.3 核苷酸的功能
1.2.4 核苷酸池的研究进展
1.2.5 核苷酸代谢
1.2.5.1 核苷酸的合成代谢
1.2.5.1.1 嘌呤核苷酸的合成代谢
1.2.5.1.2 嘌呤核苷酸的挽救途径
1.2.5.1.3 嘧啶核苷酸的合成代谢
1.2.5.1.4 嘧啶核苷酸的挽救途径
1.2.5.2 核苷酸的分解代谢
1.2.5.2.1 嘌呤核苷酸的分解代谢
1.2.5.2.2 嘧啶核苷酸的分解代谢
1.3 讨论
第2章 肝损伤过程中核酸池的变化
2.1 肝损伤过程中表达变化的基因
2.2 肝损伤过程中基因表达变化的总结
2.2.1 肝损伤过程中表达变化的基因
2.2.1.1 肝损伤过程中表达上调的基因
2.2.1.2 肝损伤过程中表达下调的基因
2.2.2 肝损伤不同时期基因表达变化的特征
4诱导的肝纤维化小鼠核酸池表达变化的特征"> 2.2.3 CCl4诱导的肝纤维化小鼠核酸池表达变化的特征
2.3 讨论
第3章 肝纤维化过程中核苷酸池的变化
3.1 材料与方法
3.1.1 实验动物
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 动物模型
3.1.5 血浆样品制备
3.1.6 肝脏切片制备
3.1.7 肝脏样品制备
3.1.8 色谱标准液配制
3.1.9 色谱条件
3.1.10 统计处理
3.2 实验结果
3.2.1 小鼠日常观察
3.2.2 血浆转氨酶检测
3.2.2.1 AST检测结果
3.2.2.2 ALT检测结果
3.2.2.3 AST/ALT比值
3.2.3 组织切片观测
3.2.4 核苷酸池检测
3.2.4.1 标准曲线
3.2.4.2 色谱实验结果
3.2.4.3 各类核苷酸含量的变化
3.2.4.4 NMP、NDP、NTP含量的变化
3.2.4.5 TAN、TGN、TUN、TCN含量的变化
3.2.4.6 核苷酸总量的变化
3.3 讨论
第4章 核苷酸代谢关键酶基因及纤维化相关重要基因的表达水平研究
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.1.4 肝脏RNA样品制备
4.1.5 反转录过程
4.1.6 荧光定量条件
4.1.7 统计处理
4.2 实验结果
4.2.0 RNA样品质量
4.2.1 小鼠核苷酸代谢途径关键酶基因表达水平测定结果
4.2.2 小鼠肝纤维化差异表达基因表达水平测定结果
4.3 结果分析
4.3.1 小鼠核苷酸代谢途径关键酶基因相对表达水平结果分析
4.3.1.1 HGPRT相对表达水平分析
4.3.1.2 Aprt相对表达水平分析
4.3.1.3 Cps1相对表达水平分析
4.3.1.4 Dpyd表达水平分析
4.3.1.5 Prps2相对表达水平分析
4.3.2 小鼠肝纤维化相关基因相对表达水平结果分析
4.3.2.1 Mmp3相对表达水平分析
4.3.2.2 Co16a1相对表达水平分析
4.3.2.3 Egr1相对表达水平分析
4.3.2.4 Mapk7相对表达水平分析
4.3.2.5 Hnfla相对表达水平分析
4.3.2.6 Cyp2a4相对表达水平分析
4.3.2.7 Cyp2j9相对表达水平分析
4.4 讨论
第5章 核苷酸池、核酸池及纤维化进程相关性研究
5.1 核苷酸池内核苷酸间的相关性分析
5.1.1 NMP、NDP、NTP间的相关性
5.1.2 AMP、GMP、UMP、CMP间的相关性
5.2 核苷酸池与纤维化进程相关性分析
5.3 核苷酸池与核酸池相关性分析
5.3.1 核苷酸池与Aprt表达水平相关性分析
5.3.2 核苷酸池与核酸池相关性分析
5.4 讨论
第6章 全文总结
附录
参考文献
在读期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用基因芯片对人肝纤维化相关基因的筛查[J]. 罗新华,杨勤,张权,程明亮. 世界华人消化杂志. 2008(14)
[2]Serial changes in expression of functionally clustered genes in progression of liver fibrosis in hepatitis C patients[J]. Yoshiyuki Takahara,Mitsuo Takahashi,Hirotaka Wagatsuma,Maiko Mori,Akihiro Tamori,Susumu Shiomi,Shuhei Nishiguchi. World Journal of Gastroenterology. 2008(13)
[3]大鼠肝纤维化模型肝组织及血清中基质金属蛋白酶抑制因子-1的动态变化[J]. 田力,陈奎生,蔡庆春,毕蕾,高圆,王凤莉,李娜,王锦玉. 药品评价. 2007(05)
[4]TGF-β1、BMP-7 mRNA在实验性肝纤维化中的表达及意义[J]. 黄宁,曾令兰,李淑莉,苏凤菊. 微循环学杂志. 2007(03)
[5]Dynamic expression of extracellular signal-regulated kinase in rat liver tissue during hepatic fibrogenesis[J]. Xiao-Lan Zhang, Jin-Ming Liu, Chang-Chun Yang, Yi-Lin Zheng, Li Liu, Zhan-Kui Wang, Hui-Qing Jiang, Department of Gastroenterology, the Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(39)
[6]肥大细胞及蛋白酶激活受体-2在大鼠实验性肝纤维化中的变化[J]. 徐可树,李琪,周霞. 中华肝脏病杂志. 2006(10)
[7]Expression and location of Smad2,4 mRNAs during and after liver fibrogenesis of rats[J]. Yang Liu, Hai-Feng Zou, Hua-Feng Xu, Ping Lin, Xiao-Guang Yu, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China Li-Feng Wang, Department of Pathology of the First Clinical College, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China Xiao-Yan Song, Master degree student of Department of Pathology of Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China Hai-Hong Zheng, Department of Experimental Animal of the Second Clinical College, Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(10)
[8]肝纤维化基质金属蛋白酶-26/基质金属蛋白酶抑制因子-1mRNA的表达[J]. 邹海峰,刘洋,徐华锋,林平,赵丹丹,吴进荣,刘鑫,于晓光. 中华肝脏病杂志. 2006(02)
[9]Nitric oxide synthase and heme oxygenase expressions in human liver cirrhosis[J]. BeatriceJGoh,HoonEngKhoo,BeeTeeTan,KangHoeLee. World Journal of Gastroenterology. 2006(04)
[10]四氯化碳损伤小鼠肝脏基因表达谱的变化[J]. 陈勇,程明,夏启松,杜鹏. 药学学报. 2005(10)
本文编号：2931770
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/2931770.html
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