大鼠肝纤维化恢复期肝星状细胞凋亡的分子机制及来氟米特的调节作用

发布时间：2020-12-25 01:14

　　肝脏由于其特殊的生理位置和血液供应,易于受到多种外界因素的刺激,进而发生肝脏损伤。肝脏长时期处于损伤-恢复的状态,往往会导致肝纤维化的发生。肝纤维化（hepatic fibrosis）是慢性肝病长期发展后的必然过程。其疾病特征是以胶原为主的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）在肝内沉积,造成肝小叶结构改建、假小叶和结节形成,严重的肝纤维化可以发展为肝硬化,乃至肝功能衰竭。近来研究认为,肝纤维化属可逆性病变。如果能够去除损伤因素,随着时间的变化,肝纤维化是可以自然恢复的,表现为沉积的胶原降解,肝脏结构和肝脏功能的恢复。文献报道,在肝纤维化形成及恢复阶段,Kupffer细胞发挥了双刃剑的作用。在肝纤维化进展期可促进HSC的激活,促进肝纤维化的形成;在肝纤维化恢复期能促进活化的HSC失活、凋亡,促进ECM的降解,从而抑制肝纤维化的形成。然而,Kupffer细胞在肝纤维化恢复期诱导HSC凋亡的研究较少,其作用的细胞因子、细胞信号传导通路目前尚不清楚。为了进一步揭示肝纤维化恢复过程中Kupffer细胞的作用,我们拟通过分离肝纤维化恢复模型大鼠的Kupffer细胞来进行相... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

大鼠肝组织病理学检测(HE染色)

AB图3 恢复期KCCM对活化HSC的作用。（A）BrdU细胞增殖实验。（B）细胞凋亡实验。Fig.3. Effect of recovery KCCM on activated HSCs. (A) BrdU cell proliferation assays. (B) Cellapoptosis assays. Results are the mean ± S.D. from three independent experiments. #P < 0.01 versusserum control values; *P < 0.05, **P < 0.01 versus recovery KCCM values.3.2 恢复期KCCM诱导HSC凋亡依赖caspase途径PARP是caspase-3的底物，当caspase-3活化时PARP被剪切，因此检测PARP的剪切程度是检测caspase-3活化的一个重要指标。为检测恢复期KCCM诱导HSC是否39

胞的 FasL 和 TNF-α 表达水平没有明显改变；而恢复期 Kupffer 细胞的 TRAIL 表达水平明显升高（图 5）。利用 RNA 干涉实验进一步证明 TRAIL 在恢复期 KCCM 诱导HSC 凋亡中的作用。通过与 TRAIL 表达质粒（pcDNA3.1a-TRAIL）共转染，利用Western blot 筛选出能够有效干涉 TRAIL 表达的 siRNA。结果显示，2′siRNA 和3′ siRNA 均能有效抑制 TRAIL 表达（图 6A）。在恢复期 Kupffer 细胞中转染 3′siRNA 能明显降低 TRAIL 的表达（图 6B）。用 3′ siRNA 转染恢复期 Kupffer 细胞制备的 KCCM（3′ siRNA KCCM）刺激培养活化的 HSC，HSC 的凋亡率与对照组相比显著降低（图 6C）。结果表明，在恢复期 KCCM 诱导 HSC 凋亡中 TRAIL 发挥重要作用。


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