肝内乙型肝炎病毒准种分布与核苷类似物停药复发的关系研究

发布时间：2020-12-29 12:45

　　目的：研究核苷类似物治疗后完全应答的慢性乙型肝炎患者在停药时肝内HBV准种分布情况，从准种角度探讨核苷类似物停药复发的分子病毒学机制。方法：选择经核苷类似物治疗后达到停药标准（实现HBeAg血清转换、HBVDNA持续阴转后继续用药48周）的慢性乙型肝炎患者10例，进行肝组织活检，抽提肝内HBVDNA，PCR扩增HBV RT区基因，克隆后测序。并对所有患者每4周随访1次，连续随访24周，观察停药后的病毒学应答情况，根据病毒学应答情况分为持续应答组和停药复发组。应用生物信息学技术分析停药复发组和持续应答组之间肝内HBV准种的复杂度和多样性的差异，对病毒序列应用邻接法构建系统进化树。结果：停药复发组的血清HBsAg水平明显高于持久应答组，两组间差异有统计学差异(P=0.028)。两组间肝组织病理学结果无论是炎症水平还是纤维化分期以及肝组织内HBsAg的免疫组化差异均无统计学意义(P>0.05)。停药复发组和持续应答组肝内HBV准种复杂度和准种多样性无统计学差异(P>0.05)。进化树分析结果显示停药复发组和持续应答组的序列分支枝长相似。结论：停药时的血清HBsAg水平越低越不易复... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：43 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
符号说明
摘要
Abstract
引言
研究对象和方法
    1. 研究对象
    2. 材料与方法
        2.1 实验主要仪器及器材
        2.2 实验主要试剂
        2.3 实验方法
            2.3.1 抽提肝组织内 HBV-DNA
            2.3.2 巢式 PCR 扩增 HBV RT 区基因
            2.3.3 PCR 产物纯化回收
            2.3.4 PCR 纯化产物加 A 与连接反应
            2.3.5 转化
            2.3.6 阳性重组克隆的鉴定
            2.3.7 阳性重组克隆的扩增
            2.3.8 阳性重组克隆的测序
        2.4 肝功能、乙肝两对半定量和血清及肝内 HBVDNA 载量检测
        2.5 生物信息学分析
            2.5.1 序列的一般性处理
                2.5.1.1 检测并去除混杂序列
                2.5.1.2 序列比对
                2.5.1.3 检测重组序列
            2.5.2 病毒基因型鉴定
            2.5.3 病毒准种分析
            2.5.4 进化树分析
        2.6 统计学处理
结果
    3.1 一般情况
    3.2 停药时血清 HBsAg、HBcAb 及肝内 HBV DNA 与核苷（酸）类似物停药复发的关系
    3.3 病理学检测结果分析
    3.4 HBV 基因组 RT 区准种的复杂度和多样性
    3.5 HBV S 区的终止密码子的突变情况
    3.6 进化树分析
讨论
结论
攻读学位期间发表的学术论文
附录
参考文献
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2945662