提高乙型肝炎病毒P基因区PCR检测阳性率的策略及阿德福韦酯治疗中HBV基因型耐药临床监测研究

发布时间：2021-01-07 19:56

　　抗病毒治疗是改善慢性乙型肝炎患者预后、提高生活质量的主要措施。核苷（酸）类似物的临床应用极大地改善了病人的病情。理论上,所有口服核苷（酸）类似物在治疗过程中均可出现耐药性,HBV对核苷类抗病毒药物产生的耐药性是阻碍其临床应用、降低其疗效的主要原因。因此在慢性HBV感染抗病毒治疗中进行耐药基因监测对于指导临床用药,包括撤换或增加其他核苷（酸）类似物十分重要,倍受临床重视。HBV基因变异已经被证明与HBV的耐药性有直接的因果关系。HBV变异的出现可通过基因型检测来诊断,而PCR产物直接测序的方法能够鉴定已知的并发现新的变异位点。为了鉴定潜在的基因型耐药,在病毒学突破时分离提取的HBV DNA序列及其推导出的氨基酸序列需与患者治疗前标本的序列和野毒株序列相对比以确定导致对某种抗病毒药物耐药的位点替换。长期以来,人们对PCR假阴性问题认识不足。在实际应用中有许多因素可能造成假阴性结果,要成功地得到靶序列的扩增,PCR要求模板、引物、dNTP、DNA聚合酶和缓冲液之间的无数复杂相互作用。由于HBV DNA的P基因区是非保守区,检测时可能会由于引物结合区的碱基的变异而出现假阴性结果。因此提高HBV... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
主要英文缩写与符号说明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 提高HBV P基因区PCR检测阳性率的策略
    材料和方法
        一、主要仪器及试剂
        二、血清标本
        三、实验方法
            （一） 不同血清HBV DNA抽提得率的比较
            （二） 优化PCR反应条件
            （三） 选择最佳引物
            （四） 降低退火温度
            （五） 应用3′末端碱基游移兼并引物技术
        四、拉米夫定治疗失败病人HBV基因型耐药的检测
        五、统计分析
    结果
        一、HBV DNA标准品定量
        二、不同血清处理方法PCR产物琼脂糖凝胶电泳
        三、PCR反应条件的优化
        四、最佳引物的选择
        五、降低退火温度
        六、应用3′末端碱基游移兼并引物
        七、拉米夫定治疗失败病人HBV基因型耐药的检测
    讨论
    本部分研究小结
    参考文献
第二部分 阿德福韦酯治疗中HBV基因型耐药临床监测研究
    材料和方法
        一、研究对象
        二、主要仪器及试剂
        三、方法
            （一） 临床指标检测
            （二） 建立包已知耐药相关突变位点碱基HBV P基因区的PCR检测方法
            （三） 56例阿德福韦酯治疗病人血清HBV基因型耐药临床监测
        四、统计学分析
    结果
        一、病例资料
        二、PCR优化结果
        三、56例阿德福韦酯治疗病人HBV基因型耐药临床监测结果
        四、可能影响阿德福韦酯治疗效果的多因素分析
    讨论
    本部分研究小结
    参考文献
综述:乙型肝炎病毒表型耐药体外实验模型研究进展
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]HBV基因定量分析技术的应用价值、存在问题及展望[J]. 缪晓辉,孔宪涛.  肝脏. 1999(03)
[2]HBV基因定量分析技术的原理和方法[J]. 缪晓辉,戚中田.  肝脏. 1999(01)



本文编号：2963147