多模态（磁性/光学）纳米探针无创评估小鼠早期肝纤维化可行性研究

发布时间：2021-01-09 00:53

　　肝纤维化是各种病因的慢性肝损伤的共同转归,是全世界共同的公众健康威胁。早期发现肝纤维化并进行积极的干预,将可以很大程度控制甚至逆转肝纤维化。但是,目前还没有一种有效的早期肝纤维化无创评估方法。众多的研究已经证实肝星状细胞是肝纤维化过程中肝脏纤维发生的主要效应细胞。肝纤维化时,随着HSCs激活增殖、肝内血管新生,肝组织的整合素αvβ3表达水平上调。αvβ3是整合素蛋白中的ECM （extracellular matrix,细胞外基质）受体。它介导细胞和多种ECM黏附,并和细胞因子协同作用,是组织损伤修复和基质重塑的重要因素。精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（arginine-glycine-asparagic acid, RGD）是对整合素高度靶向性配基的最常见识别位点。而精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-（右旋）酪氨酸-赖氨酸（RGDyK）、精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-（右旋）苯丙氨酸-赖氨酸（RGDfK）等环肽表现出较线状肽更好的和整合素αvβ3受体特异结合的能力。分子影像学是用影像技术在活体内进行细胞和分子水平的生物过程的描述和测量的科学。目前分子影像学发展迅速,各种方法各有优点。将MR和光学成... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

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英文缩略语
中文摘要
Abstract
前言
    参考文献
第一部分 靶向多模态纳米探针的设计、合成和表征
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 实验设计
vβ₃多模态纳米探针的合成">        1.3 靶向整合素α_vβ₃多模态纳米探针的合成
        1.4 测定荧光探针的比例
        1.5 用SDS-PAGE凝胶电泳验证纳米探针的均一性和荧光基团的结合
        1.6 用MALDI-TOF MS测定纳米探针的分子量
        1.7 用凝胶渗透色谱法测定分子量
        1.8 纳米探针粒径分布和Zeta电位的测定
3+含量">        1.9 用ICP-AES测定纳米探针中的Gd³⁺含量
        1.10 检测纳米探针的驰豫率
    2. 结果
        2.1 cRGDyK的制备与表征
        2.2 化合物1的表征
        2.3 化合物2的表征
        2.4 化合物6的表征
        2.5 化合物7的表征
        2.6 荧光探针的比例
        2.7 产率
        2.8 纳米探针的均一性和荧光基团的结合
        2.9 MALDI-TOF MS测定纳米探针的分子量
        2.10 用凝胶渗透色谱法（GPC）测定分子量
        2.11 纳米探针粒径分布和Zeta电位
3+含量">        2.12 纳米探针中的Gd³⁺含量
        2.13 纳米探针的驰豫率
        2.14 纳米探针和G5-Dendrimer的各项参数
    3. 讨论
    参考文献
第二部分 体外细胞实验验证纳米探针的细胞毒性和体外靶向作用
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 所有的动物实验都依照复旦大学伦理委员会评估和认可的指南进行
        1.3 配液
        1.4 小鼠HSCs的分离
        1.5 小鼠HSCs活率、得率、细胞传代和培养
        1.6 小鼠HSCs的鉴定
        1.7 G5-Dendrimer及各种纳米探针对小鼠原代HSCs细胞的毒性实验
3受体的表达,并与高表达整合素α_vβ₃受体的U87MG细胞比较">        1.8 Western blot检测小鼠原代HSC活化后β₃受体的表达,并与高表达整合素α_vβ₃受体的U87MG细胞比较
        1.9 流式细胞仪检测靶向纳米探针和小鼠原代活化HSCs细胞的结合
        1.10 共聚焦显微镜观测不同条件下探针在小鼠原代活化HSCs内的分布
        1.11 统计
    2. 结果
        2.1 得率和活性
        2.2 光学显微镜观察
        2.3 油红O染色
        2.4 Desmin和α-SMA染色
        2.5 两种纳米探针对小鼠原代HSCs的毒性
        2.6 Wester blot结果
        2.7 流式细胞仪检测靶向纳米探针和小鼠原代活化HSCs细胞的结合
        2.8 共聚焦显微镜观测不同条件下探针在小鼠原代活化HSCs内的分布
    3. 讨论
    参考文献
第三部分 TAA诱导的小鼠肝纤维化模型的建立及靶向纳米探针在模型体内的生物分布
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 动物模型的建立和鉴定
125I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的制备">        1.3 ¹²⁵I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的制备
125I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的分布">        1.4 模型小鼠体内¹²⁵I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的分布
        1.5 肝组织放射自显影分析
        1.6 统计
    2. 结果
        2.1 小鼠肝脏H&E染色和镜下肝脏炎症活动度分级及纤维化分期
        2.2 小鼠肝脏天狼星红染色及计算机图像分析结果
125I-Den-RGD在肝脏内的分布显著增加">        2.3 模型小鼠体内¹²⁵I-Den-RGD在肝脏内的分布显著增加
        2.4 24h肝组织放射自显影
    3. 讨论
    参考文献
第四部分 用光学方法追踪靶向多模态纳米探针的分布
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 动物模型的建立
        1.3 正常及不同造模时间模型小鼠活体及肝脏的离体近红外荧光光学显像
        1.4 正常及不同造模时间模型小鼠肝脏的冰冻切片免疫荧光染色
    2. 结果
        2.1 正常及不同造模时间模型小鼠活体及肝脏的离体近红外荧光光学显像
        2.2 正常及不同造模时间模型小鼠肝脏的冰冻切片免疫荧光染色
    3. 讨论
    参考文献
第五部分 磁共振无创评估模型小鼠肝纤维化的初步研究
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 动物模型的建立
        1.3 小鼠肝脏的MRI成像
    2. 结果
        2.1 正常小鼠磁共振结果
        2.2 模型4周小鼠磁共振结果
        2.3 模型8周小鼠磁共振结果
        2.4 模型12周小鼠磁共振结果
        2.5 正常小鼠和不同造模时间模型小鼠注射Den-RGD后,肝脏T1加权的MR信号随时间变化的对比
        2.6 模型小鼠肝磁共振成像图的减影图
    3. 讨论
    参考文献
全文总结
综述:肝纤维化的分子机制
    参考文献
博士期间发表或者拟发表的论文和专利
致谢



本文编号：2965646