载5-ASA的SiO_2纳米粒对溃疡性结肠炎小鼠靶向性治疗研究

发布时间：2017-04-10 14:01

  本文关键词：载5-ASA的SiO_2纳米粒对溃疡性结肠炎小鼠靶向性治疗研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是炎症性肠病的一种，是慢性、复发性，且发作与缓解相交替的非特异性炎症性疾病，常累及黏膜及黏膜下层。临床上治疗UC的一线用药是5-ASA，但由于疾病严重程度和病变结肠药物浓度低，效果常常不尽如人意，因此迫切需要提高病变结肠的药物浓度。随着纳米科技的发展，靶向传送至病变结肠的的药物成为可能。本研究的目的是制备具有靶向至炎症结肠的载5-ASA的二氧化硅纳米微粒(5-ASA-SiO2NPs)，并观察其治疗UC小鼠模型的疗效，为今后开发和应用5-ASA纳米粒给药系统治疗溃疡性结肠炎奠定理论基础。 方法：首先用微乳法制备SiO2NPs，通过透射电子显微镜(TEM)进行表征测定。再经过一系列的修饰加工，将传统药物5-ASA嫁接到经过修饰的SiO2NPs表层，得到产物5-ASA-SiO2NP。CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测5-ASA、SiO2NPs及5-ASA-SiO2NPs对人结直肠腺癌细胞(Caco-2)的体外细胞毒性。 60只8-9周龄的雄性BALB/c小鼠，随机分为6组，每组10只。葡聚糖硫酸钠(DSS)自饮法建立急性结肠炎模型，分组及给药情况如下： ①正常对照组：自由饮用蒸馏水，生理盐水日一次灌胃，共7天； ②疾病模型组：自由饮用5%DSS溶液，生理盐水日一次灌胃，共7天； ③正常剂量5-ASA组：自由饮用5%DSS溶液，并予5-ASA200mg/kg日一次灌胃，共7天； ④高剂量5-ASA组：自由饮用5%DSS溶液，并予5-ASA400mg/kg日一次灌胃，共7天； ⑤SiO2NPs组：自由饮用5%DSS溶液，并予SiO2NPs100mg/kg日一次灌胃，共7天； ⑥5-ASA-SiO2NPs组：自由饮用5%DSS溶液，并予5-ASA-SiO2NPs100mg/kg日一次灌胃，共7天； 造模开始后，详细观察并记录每只小鼠的一般情况及体重下降、大便性状、便血情况，按疾病活动指数(DAI)标准评分。造模第8天处死小鼠，取炎症结肠进行HE染色病理学观察。ELISA法检测小鼠结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性及小鼠血清中炎症因子TNF-α，IL-6的水平。实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)法检测各组小鼠结肠黏膜TNF-α mRNA，IL-6mRNA的表达水平。 结果：1、5-ASA-SiO2NP的合成及载药量 设计合成了粒径约90nm的SiO2NPs，对其进行透射电镜(TEM)表征测定，结果表明，该纳米微粒大小均一，表面圆整光滑，分散性好。经过一系列修饰后，将5-ASA嫁接到表层，得到产物5-ASA-SiO2NP。载药量为13.79±2.50%。 2、体外细胞毒性试验 在5-ASA、SiO2NPs及5-ASA-SiO2NPs浓度为1mg/ml的条件下，CCK-8法检测Caco-2细胞在12h的存活率分别为94.16±3.31%、74.81±2.03%和84.28±1.73%。 3、DAI及结肠病理组织学评分 ①模型组小鼠DAI评分9.00±2.21、结肠病理组织学评分10.00±1.50，与正常组小鼠DAI评分0.10±0.32、结肠病理组织学评分0相比明显升高，差异具有统计学意义(P0.05)，提示UC小鼠模型制备成功； ②SiO2NPs组小鼠DAI评分9.33±1.66、结肠病理组织学评分9.33±1.73，与模型组相比，差异无统计学意义(P0.05)； ③正常剂量5-ASA组、高剂量5-ASA组、5-ASA-SiO2NPs组DAI评分分别为6.70±1.99、5.20±2.11、4.80±1.81，结肠病理组织学评分分别为6.10±0.99、4.00±0.82、3.90±1.10，与模型组相比均明显降低，差异具有统计学意义(P0.05)； ④高剂量5-ASA组及5-ASA-SiO2NPs组与正常剂量5-ASA组比较DAI及结肠病理组织学评分明显降低，差异具有统计学意义(P0.05)； ⑤高剂量5-ASA组与5-ASA-SiO2NPs组相比较，差异无统计学意义(P0.05)。 4、结肠组织MPO活性 ①模型组小鼠结肠组织MPO活性34.52±2.22U/mg组织，与正常组MPO活性1.97±0.82U/mg组织相比明显升高，差异具有统计学意义(P0.05)； ②SiO2NPs组MPO活性34.09±1.72U/mg组织，与模型组相比，差异无统计学意义(P0.05)； ③正常剂量5-ASA组、高剂量5-ASA组、5-ASA-SiO2NPs组MPO活性分别为25.65±1.97U/mg组织、10.26±1.30U/mg组织、10.88±1.44U/mg组织与模型组相比均不同程度降低，差异具有统计学意义(P0.05)； ④高剂量5-ASA组及5-ASA-SiO2NPs组结肠组织MPO活性要低于正常剂量5-ASA组，差异有统计学意义(P0.05)； ⑤高剂量5-ASA组与5-ASA-SiO2NPs组相比较，差异无统计学意义(P0.05)。 5、血清中IL-6、TNF-α在蛋白水平的表达 ①模型组小鼠血清中IL-6在蛋白水平表达量315.78±31.12pg/ml、TNF-α表达量284.47±27.13pg/ml，与正常组IL-6表达量53.18±9.04pg/ml、TNF-α表达量42.21±7.04pg/ml相比明显升高，差异有统计学意义(P0.05)； ②SiO2NPs组小鼠血清中IL-6在蛋白水平表达量317.79±18.91pg/ml、TNF-α表达量282.00±22.71pg/ml，与模型组IL-6、TNF-α表达量相比，差异无统计学意义(P0.05)； ③正常剂量5-ASA组、高剂量5-ASA组、5-ASA-SiO2NPs组血清中IL-6在蛋白水平表达量分别为226.18±17.46pg/ml、126.45±8.85pg/ml、135.07±10.92pg/ml，TNF-α在蛋白水平表达量分别为153.31±17.91pg/ml、84.03±9.32pg/ml、87.49±6.99pg/ml，与模型组相比均不同程度降低，差异具有统计学意义(P0.05)； ④高剂量5-ASA组及5-ASA-SiO2NPs组血清中IL-6、TNF-α在蛋白水平表达量要低于正常剂量5-ASA组，差异有统计学意义(P0.05)； ⑤高剂量5-ASA组与5-ASA-SiO2NPs组小鼠相比较，差异无统计学意义(P0.05)。 6、结肠黏膜中IL-6mRNA、TNF-α mRNA的表达 ①模型组小鼠结肠黏膜中IL-6mRNA表达量26.11±1.64、TNF-α mRNA表达量14.99±1.55，与正常组小鼠IL-6mRNA表达量1.11±0.27、TNF-α mRNA表达量1.07±0.25相比明显升高，差异有统计学意义(P0.05)； ②SiO2NPs组小鼠结肠黏膜中IL-6mRNA表达量25.52±1.65、TNF-α mRNA表达量14.67±1.29，与模型组相比，差异无统计学意义(P0.05)； ③正常剂量5-ASA组、高剂量5-ASA组、5-ASA-SiO2NPs组结肠黏膜中IL-6mRNA的表达量分别为10.32±0.98、4.63±0.67、4.73±0.50，TNF-α mRNA的表达量分别为4.73±0.90、2.02±0.48、1.83±0.39，与模型组相比均不同程度降低，，差异具有统计学意义(P0.05)； ④高剂量5-ASA组及5-ASA-SiO2NPs组小鼠结肠黏膜IL-6mRNA、TNF-αmRNA的表达要低于正常剂量5-ASA组，差异有统计学意义(P0.05)； ⑤高剂量5-ASA组与5-ASA-SiO2NPs组相比较，差异无统计学意义(P0.05)。 结论：1、成功制备了具有有效载药量，安全性较高，且对UC小鼠模型炎症结肠有较强靶向性的载药纳米粒5-ASA-SiO2NPs； 2、靶向性5-ASA-SiO2NP能有效地治疗UC小鼠模型，SiO2NPs负载低剂量的5-ASA可以达到高剂量的治疗效果；其作用机制可能通过降低炎症因子TNF-α及IL-6的表达而达到疗效； 3、本研究为今后5-ASA纳米粒给药系统的开发和临床上应用治疗溃疡性结肠炎奠定了理论基础。
【关键词】：溃疡性结肠炎 纳米科技 5-ASA DSS 动物模型
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R574.62
【目录】：

• 摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-17
• 第一章 负载 5-ASA 纳米粒的制备及细胞毒性试验17-28
• 引言17
• 1.1 主要仪器与试剂17-19
• 1.2 实验方法19-22
• 1.3 统计学处理22-23
• 1.4 实验结果23-25
• 讨论25-28
• 第二章 5-ASA-SiO_2NPs 对溃疡性结肠炎小鼠的治疗研究28-52
• 引言28
• 2.1 实验材料28-29
• 2.2 实验方法29-37
• 2.3 统计学处理37
• 2.4 实验结果37-45
• 讨论45-52
• 结论52-53
• 参考文献53-57
• 综述57-69
• 参考文献65-69
• 致谢69-70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：296837