胞嘧啶脱氨酶APOBEC3抗乙型肝炎病毒及其作用机制的研究
发布时间：2021-01-13 03:36
肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是人类最常见的恶性肿瘤之一,在许多地区尤其是非洲和亚洲,乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的感染被认为是HCC发生的一个高危因素,许多慢性HBV感染者最终发生严重的肝脏疾病包括慢性肝炎、肝硬变和肝细胞癌,这些疾病目前每年导致约75万人死亡。HBV感染后不同个体对HBV的自发清除能力有很大的差异,青少年和成年人在感染HBV后大部分个体能产生强大的抗病毒反应,最终清除病毒;而小部分（大约5%-10%）不能清除病毒而转变为慢性病毒携带者,或进一步发展为慢性肝炎;新生儿在感染HBV后90%以上发展为慢性肝炎。已知HBV的清除是由一种包括干扰素和其他一些细胞因子在内的非溶细胞机制所介导,但干扰素诱导的HBV DNA清除的确切机制现在还不清楚。载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3（apolipoprotein BmRNA-editing catalytic polypeptide-like protein 3,APOBEC3）是哺乳动物所特有的胞嘧啶脱氨酶,目前已发现至少有7个成员:A3A、A3B...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：172 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
A3B一H习伴DN户己.1质粒图谱
取州自材153盆劲伦怕”公，1王‘创阳念为i图1一 2pGLZ一basic和psv-压galactosidase载体的环状图谱Figl一 2MaPofPGLZ· basieandPSv-B一galactosid王记PlasmidsA.PGLZ一 basicB.PsV一压gal朗tosid斑姆223荧光素酶活性分析上述多个含荧光素酶报告基因质粒转染细胞48hr后，PBS洗两次，用80ul裂解缓冲液裂解细胞。裂解完全后转移到 0.sulEP管中，振荡器上振荡15秒，离心后吸取上清一80℃保存待测。应用Lucifen处姆 Assaysystem‘ t(Promega公司)分析荧光素酶活性:取20川上清至%孔板的孔中，迅速每孔加入100川荧光素酶底物，10秒内在酶标仪 MultilabelCounte:(场人 LLAC1420)上测其发光值。另取30川上清用于p一半乳糖昔酶酶活力测试，操作参照试剂盒说明书进行。酶标仪上读取450lun的吸光度值
LlAPOBEC3一H刀PcDNA3.1质粒在细胞内表达的鉴定:A3B一H刀peDNA3.1真核表达质粒经Hindln和Notl限制酶酶切鉴定条带大小正确(见图1一3)，纯化产物经DNA测序证实序列正确，说明A3B一HA/peDNA3.l真核表达质粒构建成功。A3A一HA/pcDNA3.l，A3e一HA/peoNA3.l，A3F一 HA/PcDNA3.1和A3G一HA/peDNA3.1真核表达质粒也经DNA测序证实序列正确。为验证各质粒是否能正确表达出蛋白，我们分别用各APOBEC3一HA/pcDNA3.l真核表达质粒转染HepGZ细胞，通过 WestemBlot方法用抗HA抗体检测相应蛋白的表达，结果如图1一4所示
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inhibition of hepatitis B virus replication by APOBEC3G in vitro and in vivo[J]. Yan-Chang Lei, You-Hua Hao, Zheng-Mao Zhang, Bao-Ju Wang, Dong-Liang Yang, Division of Clinical Immunology, Department of Infectious Diseases, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Yong-Jun Tian, Yan Yang, Dong-Liang Yang, Center of Experimental Medicine, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Meng-Ji Lu, Department of Microbiology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Fei-Li Gong, Department of Immunology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(28)
本文编号：2974135
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：172 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
A3B一H习伴DN户己.1质粒图谱
取州自材153盆劲伦怕”公，1王‘创阳念为i图1一 2pGLZ一basic和psv-压galactosidase载体的环状图谱Figl一 2MaPofPGLZ· basieandPSv-B一galactosid王记PlasmidsA.PGLZ一 basicB.PsV一压gal朗tosid斑姆223荧光素酶活性分析上述多个含荧光素酶报告基因质粒转染细胞48hr后，PBS洗两次，用80ul裂解缓冲液裂解细胞。裂解完全后转移到 0.sulEP管中，振荡器上振荡15秒，离心后吸取上清一80℃保存待测。应用Lucifen处姆 Assaysystem‘ t(Promega公司)分析荧光素酶活性:取20川上清至%孔板的孔中，迅速每孔加入100川荧光素酶底物，10秒内在酶标仪 MultilabelCounte:(场人 LLAC1420)上测其发光值。另取30川上清用于p一半乳糖昔酶酶活力测试，操作参照试剂盒说明书进行。酶标仪上读取450lun的吸光度值
LlAPOBEC3一H刀PcDNA3.1质粒在细胞内表达的鉴定:A3B一H刀peDNA3.1真核表达质粒经Hindln和Notl限制酶酶切鉴定条带大小正确(见图1一3)，纯化产物经DNA测序证实序列正确，说明A3B一HA/peDNA3.l真核表达质粒构建成功。A3A一HA/pcDNA3.l，A3e一HA/peoNA3.l，A3F一 HA/PcDNA3.1和A3G一HA/peDNA3.1真核表达质粒也经DNA测序证实序列正确。为验证各质粒是否能正确表达出蛋白，我们分别用各APOBEC3一HA/pcDNA3.l真核表达质粒转染HepGZ细胞，通过 WestemBlot方法用抗HA抗体检测相应蛋白的表达，结果如图1一4所示
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inhibition of hepatitis B virus replication by APOBEC3G in vitro and in vivo[J]. Yan-Chang Lei, You-Hua Hao, Zheng-Mao Zhang, Bao-Ju Wang, Dong-Liang Yang, Division of Clinical Immunology, Department of Infectious Diseases, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Yong-Jun Tian, Yan Yang, Dong-Liang Yang, Center of Experimental Medicine, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Meng-Ji Lu, Department of Microbiology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Fei-Li Gong, Department of Immunology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(28)
本文编号：2974135
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