WHV-HBV嵌合病毒复制型克隆构建及其持续复制小鼠模型的建立

发布时间：2021-01-16 06:18

　　目的1.用HBV基因组编码HBsAg的碱基序列替换WHV基因组中相应的同源序列,构建WHV-HBV嵌合病毒可复制性克隆。2.通过尾静脉高压水注射的方法,建立WHV-HBV嵌合病毒持续复制小鼠模型。了解WHV-HBV嵌合小鼠体内的免疫应答,探索持续复制的机制。3.研究HBsAg DNA疫苗在WHV-HBV嵌合病毒小鼠模型上的免疫保护效力。方法1.以本实验室构建的pBS-WHV1.3和pBS-HBV1.3为模板,利用分子克隆技术,用HBV基因组中编码S区”a”抗原决定簇、Major HBsAg, Middle HBsAg的碱基序列替换WHV基因组中对应的同源序列。构建成功的嵌合WHV-HBV质粒,通过体外转染Huh7、HepG2细胞,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测转染细胞上清中的HBsAg。2.采用高压尾静脉注射的方式将pBS-WHV1.3、 WHV-HBV-Sa、 WHV-HBV-SS、 WHV-HBV-MS克隆转染到BALB/c小鼠肝脏内,定期采集小鼠血清和肝脏标本,通过酶联免疫吸附实验、PCR、Southern Blot及免疫组织化学染色等方法监测小鼠体内病毒血症。尾静脉注射36... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文縮略词表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 构建WHV-HBV嵌合病毒复制性克隆
    1 材料
    2 方法
    3. WHV-HBV嵌合质粒体外细胞转染
    结果
    小结
    讨论
第二部分 建立WHV-HBV嵌合病毒尾静脉高压水注射持续复制小鼠模型
    1 材料
    2 方法
    结果
    小结
    讨论
第三部分 HBsAg DNA疫苗对嵌合病毒基因组的清除作用
    材料与方法
    结果
    小结
    讨论
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：2980312