RIG-I促进肝细胞胆固醇合成及增强脂肪肝进展的机制研究
发布时间：2021-02-14 03:26
随着社会经济的发展,肝癌的发生率在过去十年间显著增加,严重影响着人类的健康。肝癌常见的危险因素包括乙肝病毒、丙肝病毒、黄曲霉素B1、烟草以及酒精。新近研究发现脂肪性肝病也是肝癌的危险因素之一,大约有4%-22%的肝癌归因于脂肪性肝病。脂肪性肝病被定义为肝脏内脂肪病理性聚集,其第一个病理阶段就是脂肪肝,当肝细胞内脂肪堆积超过细胞总体积的5%时就可以诊断为脂肪肝。脂肪肝可继续进展为脂肪性肝炎,其病理表现为免疫细胞浸润,肝细胞气球样变,细胞内出现MDB（Mallory-Denk body）,血生化检查谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）增高。脂肪性肝炎可以直接发展成为肝癌,或者先发展成为肝硬化,进而进展为肝癌。因此,脂肪性肝炎目前被认为是导致肝癌发生的重要危险因素,但对其发生发展机制所知仍然有限。目前研究认为肝脏内胆固醇堆积而引起的脂毒性和氧化应激是造成正常肝脏发展为脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）甚至肝癌的重要原因。...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pcDNA3.1（-）B质粒图谱
RIG-I促进肝细胞胆固醇合成及增强脂肪肝进展的机制研究-17-显微镜购于Olympus公司。小鼠血清全自动干式生化分析仪FDC-7000i购于FUJIFILM公司。2.2实验方法2.2.1条件性基因敲除小鼠的构建条件性敲除Rig-I基因的flox小鼠委托北京唯尚立德生物科技有限公司构建。该公司运用CRISPR技术，首先构建Cas9/gRNA，选用活性较高的gRNA经显微注射小鼠受精卵进而剪切Rig-I基因内含子的DNA，同时提供同源模板Donor，通过DNA的同源重组修复在Rig-I基因第4外显子两侧插入loxP（图2-2）。通过对子代小鼠基因组PCR鉴定获得阳性杂合子小鼠，即Rig-Ifl/+小鼠。Rig-Ifl/+小鼠经自交后得到Rig-Ifl/fl小鼠。图2-2Rig-I基因敲除策略Figure2-2.Rig-IgeneknockoutstrategyB6.Cg-Tg(Alb-cre)21Mgn/J小鼠购于美国JacksonLab公司，是肝细胞表达cre酶的小鼠。将适龄的Alb-cre小鼠与Rig-Ifl/fl小鼠杂交后得到肝细胞中Rig-I基因条件性敲除的Rig-Ifl/fl-Alb-cre（Rig-Ihep-/-）小鼠和同窝对照Rig-Ifl/fl小鼠。经过Westernblot验证，Rig-Ihep-/-小鼠肝细胞无法表达RIG-I蛋白（图2-3）。图2-3Rig-I基因敲除效率Figure2-3.Rig-Igeneknockoutefficiency
RIG-I促进肝细胞胆固醇合成及增强脂肪肝进展的机制研究-17-显微镜购于Olympus公司。小鼠血清全自动干式生化分析仪FDC-7000i购于FUJIFILM公司。2.2实验方法2.2.1条件性基因敲除小鼠的构建条件性敲除Rig-I基因的flox小鼠委托北京唯尚立德生物科技有限公司构建。该公司运用CRISPR技术，首先构建Cas9/gRNA，选用活性较高的gRNA经显微注射小鼠受精卵进而剪切Rig-I基因内含子的DNA，同时提供同源模板Donor，通过DNA的同源重组修复在Rig-I基因第4外显子两侧插入loxP（图2-2）。通过对子代小鼠基因组PCR鉴定获得阳性杂合子小鼠，即Rig-Ifl/+小鼠。Rig-Ifl/+小鼠经自交后得到Rig-Ifl/fl小鼠。图2-2Rig-I基因敲除策略Figure2-2.Rig-IgeneknockoutstrategyB6.Cg-Tg(Alb-cre)21Mgn/J小鼠购于美国JacksonLab公司，是肝细胞表达cre酶的小鼠。将适龄的Alb-cre小鼠与Rig-Ifl/fl小鼠杂交后得到肝细胞中Rig-I基因条件性敲除的Rig-Ifl/fl-Alb-cre（Rig-Ihep-/-）小鼠和同窝对照Rig-Ifl/fl小鼠。经过Westernblot验证，Rig-Ihep-/-小鼠肝细胞无法表达RIG-I蛋白（图2-3）。图2-3Rig-I基因敲除效率Figure2-3.Rig-Igeneknockoutefficiency
【参考文献】：
期刊论文
[1]Modulation of hepatic steatosis by dietary fatty acids[J]. Alessandra Ferramosca,Vincenzo Zara. World Journal of Gastroenterology. 2014(07)
本文编号：3033039
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pcDNA3.1（-）B质粒图谱
RIG-I促进肝细胞胆固醇合成及增强脂肪肝进展的机制研究-17-显微镜购于Olympus公司。小鼠血清全自动干式生化分析仪FDC-7000i购于FUJIFILM公司。2.2实验方法2.2.1条件性基因敲除小鼠的构建条件性敲除Rig-I基因的flox小鼠委托北京唯尚立德生物科技有限公司构建。该公司运用CRISPR技术，首先构建Cas9/gRNA，选用活性较高的gRNA经显微注射小鼠受精卵进而剪切Rig-I基因内含子的DNA，同时提供同源模板Donor，通过DNA的同源重组修复在Rig-I基因第4外显子两侧插入loxP（图2-2）。通过对子代小鼠基因组PCR鉴定获得阳性杂合子小鼠，即Rig-Ifl/+小鼠。Rig-Ifl/+小鼠经自交后得到Rig-Ifl/fl小鼠。图2-2Rig-I基因敲除策略Figure2-2.Rig-IgeneknockoutstrategyB6.Cg-Tg(Alb-cre)21Mgn/J小鼠购于美国JacksonLab公司，是肝细胞表达cre酶的小鼠。将适龄的Alb-cre小鼠与Rig-Ifl/fl小鼠杂交后得到肝细胞中Rig-I基因条件性敲除的Rig-Ifl/fl-Alb-cre（Rig-Ihep-/-）小鼠和同窝对照Rig-Ifl/fl小鼠。经过Westernblot验证，Rig-Ihep-/-小鼠肝细胞无法表达RIG-I蛋白（图2-3）。图2-3Rig-I基因敲除效率Figure2-3.Rig-Igeneknockoutefficiency
RIG-I促进肝细胞胆固醇合成及增强脂肪肝进展的机制研究-17-显微镜购于Olympus公司。小鼠血清全自动干式生化分析仪FDC-7000i购于FUJIFILM公司。2.2实验方法2.2.1条件性基因敲除小鼠的构建条件性敲除Rig-I基因的flox小鼠委托北京唯尚立德生物科技有限公司构建。该公司运用CRISPR技术，首先构建Cas9/gRNA，选用活性较高的gRNA经显微注射小鼠受精卵进而剪切Rig-I基因内含子的DNA，同时提供同源模板Donor，通过DNA的同源重组修复在Rig-I基因第4外显子两侧插入loxP（图2-2）。通过对子代小鼠基因组PCR鉴定获得阳性杂合子小鼠，即Rig-Ifl/+小鼠。Rig-Ifl/+小鼠经自交后得到Rig-Ifl/fl小鼠。图2-2Rig-I基因敲除策略Figure2-2.Rig-IgeneknockoutstrategyB6.Cg-Tg(Alb-cre)21Mgn/J小鼠购于美国JacksonLab公司，是肝细胞表达cre酶的小鼠。将适龄的Alb-cre小鼠与Rig-Ifl/fl小鼠杂交后得到肝细胞中Rig-I基因条件性敲除的Rig-Ifl/fl-Alb-cre（Rig-Ihep-/-）小鼠和同窝对照Rig-Ifl/fl小鼠。经过Westernblot验证，Rig-Ihep-/-小鼠肝细胞无法表达RIG-I蛋白（图2-3）。图2-3Rig-I基因敲除效率Figure2-3.Rig-Igeneknockoutefficiency
【参考文献】：
期刊论文
[1]Modulation of hepatic steatosis by dietary fatty acids[J]. Alessandra Ferramosca,Vincenzo Zara. World Journal of Gastroenterology. 2014(07)
本文编号：3033039
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3033039.html
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