体外RNA干扰下调PTEN表达对活化肝星状细胞FAK/p130Cas及paxillin信号转导的影响
发布时间：2021-02-14 04:59
目的探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN）表达下调对体外培养的活化肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）/p130Crk相关底物蛋白（p130Crk-associated substrate,p130Cas）及桩蛋白（paxillin）信号转导的影响。方法通过腺病毒反复感染AD293细胞,扩增携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）]并表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的重组腺病毒Ad-sh RNA/PTEN及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP,并测定病毒滴度;体外培养活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,以腺病毒为载体,将靶向PTEN的RNA干扰序列（shRNA）瞬时转染活化HSC,敲减PTEN表达,构建HSC的PTEN低表达模型;采用Western blot技...
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
倒置荧光显微镜下腺病毒感染AD293细胞12h、24h的荧光表达(×100)
见 GFP 表达，24 h 有 GFP 表达的 AD2 h 出现广泛 CPE，部分细胞已经漂浮（见293 细胞 12 h GFP 表达；B: 腺病毒感染 AD293显微镜下腺病毒感染 AD293 细胞 12 h、24 h 的GFP at 12 and 24 hours after adenovirus infection iB
为 100 的 HSC 进行后续实验（见图 3）。注： A: 腺病毒感染 HSC 24 h 的 GFP 表达； B: 腺病毒感染 HSC 48 h 的 GFP 表达图.3 倒置荧光显微镜下腺病毒（M.O.I. 100）感染 HSC 24 h、48 h 的荧光表达 (×100)Fig. 3 Expressions of GFP at 24 and 48 hours after adenovirus infection in HSC at M.O.I. 100 (×100)1.3.4 靶向 PTEN 的 shRNA 下调活化 HSC 的 PTEN 表达1）腺病毒感染 HSC 48 h，实时荧光定量 PCR 技术检测各组 HSC 的 PTENmRNA 表达，以 Control 组 PTEN mRNA 表达量为 1，则 Ad-GFP 组和 Ad-shRNA/PTEN 组的 PTEN mRNA 相对 Control 组的表达倍数分别为 1.01 倍、0.54倍，Ad-shRNA/PTEN 组 HSC 的 PTEN mRNA 表达明显低于 Control 组及 Ad-GFP组（P＜0.05），而 Control 组与 Ad-GFP 组之间差异无统计学意义（P＞0.05，见表 1）。AB
【参考文献】：
期刊论文
[1]体外RNA干扰下调PTEN表达对肝星状细胞系HSC-T6迁移的影响[J]. 郝礼森,张家琪,刘博,章广玲,陈静,王玉兰,张明婷,张朋垒. 中华肝脏病杂志. 2017 (03)
[2]PTEN表达下调促进体外活化大鼠肝星状细胞黏附[J]. 郝礼森,张家琪,刘博,章广玲,靳丽敏,张明婷,张朋垒. 基础医学与临床. 2017(03)
[3]PTEN过表达及突变对活化肝星状细胞黏着斑激酶信号转导的影响研究[J]. 魏月,郝礼森,任昌镇,章广玲,陈静,王静,莫艳波,张明婷. 中国全科医学. 2016(29)
[4]Kinetin Inhibits Proliferation of Hepatic Stellate Cells by Interrupting Cell Cycle and Induces Apoptosis by Down-regulating Ratio of Bcl-2/Bax[J]. 张振纲,邹婕,黄莹,吴亮. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2015(05)
[5]Wnt信号通路调控肝星状细胞活化及增殖在肝纤维化治疗中的研究进展[J]. 马志刚,陈兰,詹灵凌,吕小平. 世界华人消化杂志. 2014(21)
[6]PTEN过表达抑制体外活化肝星状细胞Akt的磷酸化[J]. 郝礼森,张晓岚,任昌镇,李立文,王静,莫艳波,边荣荣,魏月,张家琪,刘玉龄. 实用医学杂志. 2014(07)
[7]PI3K/Akt信号通路与肝纤维化[J]. 潘澎,刘绍能. 临床肝胆病杂志. 2013(05)
[8]Wnt信号通路对酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的影响以及整合素连接激酶的调节作用[J]. 苏金玲,姜希娟,郭茂娟,马东明,范英昌. 实用医学杂志. 2013(05)
[9]骨髓充质干细胞调控尿激酶型纤溶酶原激活物表达及其对大鼠肝星状细胞凋亡的影响[J]. 宁琳,姜海行,覃山羽,张君红,杨文,孟云超. 中国组织工程研究. 2012(19)
[10]PTEN蛋白磷酸酶活性的作用[J]. 郝礼森,刘小娟,张晓岚. 中国细胞生物学学报. 2012(01)
本文编号：3033155
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
倒置荧光显微镜下腺病毒感染AD293细胞12h、24h的荧光表达(×100)
见 GFP 表达，24 h 有 GFP 表达的 AD2 h 出现广泛 CPE，部分细胞已经漂浮（见293 细胞 12 h GFP 表达；B: 腺病毒感染 AD293显微镜下腺病毒感染 AD293 细胞 12 h、24 h 的GFP at 12 and 24 hours after adenovirus infection iB
为 100 的 HSC 进行后续实验（见图 3）。注： A: 腺病毒感染 HSC 24 h 的 GFP 表达； B: 腺病毒感染 HSC 48 h 的 GFP 表达图.3 倒置荧光显微镜下腺病毒（M.O.I. 100）感染 HSC 24 h、48 h 的荧光表达 (×100)Fig. 3 Expressions of GFP at 24 and 48 hours after adenovirus infection in HSC at M.O.I. 100 (×100)1.3.4 靶向 PTEN 的 shRNA 下调活化 HSC 的 PTEN 表达1）腺病毒感染 HSC 48 h，实时荧光定量 PCR 技术检测各组 HSC 的 PTENmRNA 表达，以 Control 组 PTEN mRNA 表达量为 1，则 Ad-GFP 组和 Ad-shRNA/PTEN 组的 PTEN mRNA 相对 Control 组的表达倍数分别为 1.01 倍、0.54倍，Ad-shRNA/PTEN 组 HSC 的 PTEN mRNA 表达明显低于 Control 组及 Ad-GFP组（P＜0.05），而 Control 组与 Ad-GFP 组之间差异无统计学意义（P＞0.05，见表 1）。AB
【参考文献】：
期刊论文
[1]体外RNA干扰下调PTEN表达对肝星状细胞系HSC-T6迁移的影响[J]. 郝礼森,张家琪,刘博,章广玲,陈静,王玉兰,张明婷,张朋垒. 中华肝脏病杂志. 2017 (03)
[2]PTEN表达下调促进体外活化大鼠肝星状细胞黏附[J]. 郝礼森,张家琪,刘博,章广玲,靳丽敏,张明婷,张朋垒. 基础医学与临床. 2017(03)
[3]PTEN过表达及突变对活化肝星状细胞黏着斑激酶信号转导的影响研究[J]. 魏月,郝礼森,任昌镇,章广玲,陈静,王静,莫艳波,张明婷. 中国全科医学. 2016(29)
[4]Kinetin Inhibits Proliferation of Hepatic Stellate Cells by Interrupting Cell Cycle and Induces Apoptosis by Down-regulating Ratio of Bcl-2/Bax[J]. 张振纲,邹婕,黄莹,吴亮. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2015(05)
[5]Wnt信号通路调控肝星状细胞活化及增殖在肝纤维化治疗中的研究进展[J]. 马志刚,陈兰,詹灵凌,吕小平. 世界华人消化杂志. 2014(21)
[6]PTEN过表达抑制体外活化肝星状细胞Akt的磷酸化[J]. 郝礼森,张晓岚,任昌镇,李立文,王静,莫艳波,边荣荣,魏月,张家琪,刘玉龄. 实用医学杂志. 2014(07)
[7]PI3K/Akt信号通路与肝纤维化[J]. 潘澎,刘绍能. 临床肝胆病杂志. 2013(05)
[8]Wnt信号通路对酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的影响以及整合素连接激酶的调节作用[J]. 苏金玲,姜希娟,郭茂娟,马东明,范英昌. 实用医学杂志. 2013(05)
[9]骨髓充质干细胞调控尿激酶型纤溶酶原激活物表达及其对大鼠肝星状细胞凋亡的影响[J]. 宁琳,姜海行,覃山羽,张君红,杨文,孟云超. 中国组织工程研究. 2012(19)
[10]PTEN蛋白磷酸酶活性的作用[J]. 郝礼森,刘小娟,张晓岚. 中国细胞生物学学报. 2012(01)
本文编号：3033155
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3033155.html
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