Th17通路在酒精性肝病发病机制中的作用及白藜芦醇对其治疗作用机制的初步研究

发布时间：2017-04-13 15:08

  本文关键词：Th17通路在酒精性肝病发病机制中的作用及白藜芦醇对其治疗作用机制的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：初步探讨Th17通路在急、慢性酒精性肝病中的作用及白藜芦醇(Resveratrol, Res)对其影响机制的研究。 方法：本实验采取随机-对照的研究方法。实验分为慢性组及急性组两部分，均按照随机数字表将SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分组。(1)①慢性组50只C57BL/6小鼠，自由饮服Lieber-DeCarli对照液体饲料5天后，随机分为Control+橄榄油(olive oil)组、Control+四氯化碳(carbontetrachloride, CCL4)组、Alcohol+olive oil组、Alcohol+CCL4+羧甲基纤维素钠(Carboxymethylcellulose sodium, CMC)组、Alcohol+CCL4+Res组，每组10只。分别给予Lieber-DeCarli液体对照饲料、酒精饲料（浓度5%）饲喂8周，第8周开始Alcohol+CCL4+CMC组、Alcohol+CCL4+Res组分别给予CMC、Res（45mg/kg/d）灌胃，9周开始予Control+CCL4组和Alcohol+CCL4+CMC组、Alcohol+CCL4+Res组小鼠2.5%CCL44ml/kg腹腔注射(2次/周)，同时予Control+olive oil组和Alcohol+olive oil组橄榄油4ml/kg腹腔注射(2次/周)，第10周处死小鼠。②慢性组的研究显示在酒精性脂肪肝和纤维化组里Th17变化趋势一致，为了研究急性ALD中Th17变化情况，设计了急性模型：C57BL/6小鼠40只Control组、Alcohol组、Alcohol+CMC组、Alcohol+Res组，每组各10只，分别予Lieber-DeCarli液体对照饲料及酒精饲料(5%)自由饮服10天，第11天分别给予麦芽糖、酒精5g/kg灌胃，Alcohol+CMC组、Alcohol+Res组分别予CMC、Res45mg/kg预灌胃，10小时后处死小鼠。(2)每天观察小鼠精神状态，毛发光泽度，进食、行为情况等，每周测量小鼠体重。(3)观察各组小鼠肝脏组织大体形态变化，记录肝脏重量，计算比较肝重指数变化。(4)应用苏木素伊红(hematoxylin and eosin, HE)染色和苦味酸天狼猩红染色观察肝脏组织病理组织学改变。(5)检测血清丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartateaminotransferase, AST)及甘油三酯(Triglyceride, TG)的变化情况。(6)分离肝、脾组织内淋巴细胞，行流式细胞学检查，了解其表面CD4~+CD29~+、CD4~+CD49~+表达情况。(7)采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescentquantitation PCR, Real-time qPCR)方法检测检测肝组织中IL-6、TGF-β、α5β1、IL-17、RORγt、STAT3、Socs3、IRF4的表达情况及白藜芦醇对上述指标的影响。 结果：1慢性模型：与Control+olive oil组相比，Control+CCL4组血清ALT、AST和TG无改变，Alcohol+olive oil组ALT、AST和TG升高(P0.05)；与Alcohol+olive oil组相比，Alcohol+CCL4+CMC组ALT、AST及TG无明显变化；与Alcohol+CCL4+CMC相比，Alcohol+CCL4+Res组均明显下降(P0.05)。急性模型：与Control组相比，Alcohol组ALT、AST及TG均显著升高(P0.05)；Alcohol+CMC组与Alcohol组比较无差异；Alcohol+Res组ALT、AST及TG表达无明显变化。2HE染色、天狼星红染色显示：慢性组Alcohol+olive oil组、Alcohol+CCL4+CMC组分别形成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化；急性组形成急性酒精性肝炎，模型建立成功。3流式细胞学检测显示：肝脏：与Control+olive oil组比较，Control+CCL4组CD4~+CD29~+、CD4~+CD49~+均无明显差异，Alcohol+olive oil组CD4~+CD29~+升高(P0.05)，CD4~+CD49~+无明显改变；与Alcohol+olive oil相比，Alcohol+CCL4+CMC组CD4~+CD29~+显著升高，有统计学意义(P0.05)，与Alcohol+CCL4+CMC组相比， Alcohol+CCL4+Res组CD4~+CD29~+显著下降，差异有统计学意义(P0.05)，CD4~+CD49~+无明显改变；脾脏：CD4~+CD29~+、CD4~+CD49~+在Control+olive oil、Control+CCL4、Alcohol+olive oil、Alcohol+CCL4+CMC、Alcohol+CCL4+Res组均无明显变化。4q-PCR：慢性模型：与Control+olive oil组相比，Control+CCL4组IL-17、TGF-β、IL-6、α5β1、RORγt、STAT3、IRF4、Socs3改变不明显，无统计学意义；Alcohol+olive oil组IL-17表达升高，有统计学意义(P0.05)，TGF-β、IL-6、α5β1、RORγt、STAT3、IRF4、Socs3无明显变化；与Alcohol+olive oil组相比，Alcohol+CCL4+CMC组IL-17、TGF-β、α5β1、STAT3、IRF4、Socs3均明显升高(P0.05)，差异显著，IL-6、RORγt无明显变化；与Alcohol+CCL4+CMC相比，Alcohol+CCL4+Res组TGF-β、α5β1、IL-17、STAT3显著降低(P0.05)，IL-6、RORγt、IRF4、Socs3无明显变化。急性模型：与Control组比较，Alcohol、Alcohol+CMC组TGF-β、IRF4表达升高(P0.05)，TGF-β、IL-6、RORγt、STAT3、Socs3无明显变化，与Alcohol+CMC组相比，Alcohol+Res组TGF-β、IRF4显著下降(P0.05)。 结论：1通过长期Lieber-DeCarli液体酒精饲料饲喂及联合小剂量四氯化碳腹腔注射分别建立慢性酒精性肝炎、肝纤维化模型；短期液体酒精饲料饲喂+酒精灌胃建立急性酒精性肝炎模型。2肝内淋巴细胞表面CD4~+CD29~+表达与Th17浸润及促纤维化密切相关。3Th17通路可能在ALD进展中发挥重要作用，与急性酒精性肝病关系不明显。4TGF-β可能在酒精所致急性炎症反应、肝纤维化形成中均发挥重要作用。5α5β1可能在酒精性肝纤维化形成中发挥重要作用。6在ALD中，IL-17表达可能受STAT3、Socs3调节，但Socs3具体作用机制尚不明确。7Res可能通过下调肝内淋巴细胞CD29及组织STAT3表达抑制Th17通路发挥抗纤维化作用。8Res可能通过抑制TGF-β表达在急、慢性酒精性肝病中发挥重要作用。9Res可能通过下调α5β1发挥抗纤维化作用。10Res在酒精性肝病的不同阶段对IRF4影响不同，提示其干预机制复杂，需进一步深入研究。
【关键词】：酒精 脂肪肝 肝纤维化 免疫反应 IL-17 白藜芦醇
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-16
• 材料与方法16-23
• 结果23-29
• 附图29-39
• 附表39-45
• 讨论45-57
• 结论57-58
• 参考文献58-62
• 综述 Th17 细胞与肝脏疾病研究进展62-69
• 参考文献66-69
• 致谢69-70
• 个人简历70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 汤艳丽;邱德凯;马雄;;Th17细胞与肝细胞脂肪变性的相互作用初探[J];肝脏;2010年02期

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本文编号：303840