单细胞筛选人源HBsAb可变区基因序列及乙肝疫苗免疫后PBMCs转录组分析

发布时间：2017-04-15 15:21

  本文关键词：单细胞筛选人源HBsAb可变区基因序列及乙肝疫苗免疫后PBMCs转录组分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:克隆全人源乙型肝炎病毒表面抗体可变区序列,研究机体对于乙肝疫苗的免疫应答反应,为筛选全人源乙肝抗体、更好的预防治疗慢性乙型肝炎提供基础。方法:(1)20μg乙肝疫苗强化免疫1名乙肝表面抗体阳性的健康志愿者,7 d后,检测其乙肝表面抗体滴度大于1000 m IU/ml,采集30 ml肝素抗凝血,采用流式细胞仪分选出CD19+/CD27+/Ig G+细胞群,挑选96个单细胞,置于20μl单细胞裂解液中,采用混合引物,单细胞RT-PCR获得重链、轻链可变区序列,将PCR产物纯化后克隆至p MD#174;19-T载体,进行测序,对测序结果采用DNA Star 5.0 Meg Align和Ig BLAST进行相似性和同源性分析。(2)分离3名志愿者接种乙肝疫苗前后外周血单个核细胞,提取总RNA,检测质量合格后进行基因表达谱分析,对测序原始结果过滤得到clean数据,随后进行差异表达基因分析、GO富集分析及KEGG信号通路分析。结果:(1)成功筛选出12个阳性抗体分泌细胞,12个阳性细胞的轻链和重链PCR产物序列具有很高的同源性。(2)得到829个差异表达基因,对差异基因进行GO富集分析,发现差异表达基因主要参与的生物过程是脂肪酰基Co A还原酶(醇形成)活性、铁离子转运、蛋白复合物结合、二价铁离子跨膜转运活性等;KEGG信号通路分析显示,差异表达基因主要参与Toll样受体信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、细胞因子相互作用受体、NF-Kappa B信号通路等。结论:(1)扩增得到了可能的特异性HBs Ab重链、轻链可变区基因序列;(2)初步得到了可能参与乙肝疫苗免疫应答过程的重要基因和调控通路。
【关键词】：单细胞 单克隆抗体 乙型肝炎病毒表面抗体 外周血单个核细胞 转录组分析
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 主要英文缩略语索引6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第1章 前言12-24
• 1.1 研究背景及其理论与实际意义12-14
• 1.2 抗体的结构和功能14-18
• 1.3 单克隆抗体的研究进展概括18-22
• 1.4 数字基因表达谱技术概括22
• 1.5 本研究课题的意义及主要研究内容22-23
• 1.6 技术路线23-24
• 第2章 单细胞筛选全人源HBsAb可变区基因序列24-38
• 2.1 实验材料24-27
• 2.2 实验方法27-33
• 2.3 实验结果33-36
• 2.4 本章小结36-38
• 第3章 乙肝疫苗免疫后PBMCs转录组研究38-51
• 3.1 实验材料38-39
• 3.2 实验方法39-41
• 3.3 实验结果41-50
• 3.4 本章小结50-51
• 讨论51-54
• 结论54-56
• 参考文献56-62
• 文献综述62-68
• 参考文献65-68
• 成果目录68-70
• 致谢70

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本文编号：308685