小鼠sTGF-β1RII、sIL-13Rα2受体蛋白对日本血吸虫病肝纤维化细胞信号转导的干预

发布时间：2021-03-17 20:39

　　目的：原核表达和纯化sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，并研究该蛋白对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及其信号转导通路的影响。方法：利用小鼠3T3细胞总RNA，逆转录为cDNA，设计引物，常规PCR法扩增目的基因，构建sTGF-β1RII、sIL-13Rα2蛋白的原核表达系统，在大肠杆菌中获得融合表达，用亲和层析法制备纯化的sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，Westernblotting鉴定其抗原性。BALB/C雌性小鼠（6-8周龄，体重18-22g）随机分成8组，每组6只，除正常对照组外，其余各组均通过腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴18±2条/鼠，感染后第5周起隔天腹腔注射，持续2w，具体蛋白干预种类剂量见分组：A：正常对照组；B：模型生理盐水组（0.5ml生理盐水/小鼠）；C：sIL-13Rα2蛋白低剂量组（50μg/小鼠）；D：sIL-13Rα2蛋白高剂量组（100μg/小鼠）；E：sTGF-β1RII蛋白低剂量组（2μg/小鼠）；F：sTGF-β1RII蛋白高剂量组（20μg/小鼠）；G：联合干预组（sTGFβ1RII10μg/小鼠+sIL-13Rα275μg... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

小鼠sTGF-β1RII基因PCR的扩增

小鼠 sTGF-β1 RII 基因 PCR 的扩增 图 2 小鼠 sIL-13Rα2 基因 PA 分子量； 2 PCR 产物 1 DNA 分子量； 2 PCR 产1 Amplification of murine sTGF-β1 RII Fig.2 Amplification of murinewith PCR with PCRA marker; 2 PCR product 1 DNA marker; 2 PCR pro重组质粒 simple pMD-18T/sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2，pET28a/sIL-13Rα2 酶切鉴定将重组质粒经 NdeⅠ和 SalⅠ双酶切后，1%琼脂糖凝胶电泳结果条大小与 sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2 扩增条带迁移率相同的电泳与预期一致，如图 3、4、5、6 所示。bp 1 2bp 1 2

1 小鼠 sTGF-β1 RII 基因 PCR 的扩增 图 2 小鼠 sIL-13Rα2 基因 PCNA 分子量； 2 PCR 产物 1 DNA 分子量； 2 PCR 产物g.1 Amplification of murine sTGF-β1 RII Fig.2 Amplification of murine with PCR with PCRNA marker; 2 PCR product 1 DNA marker; 2 PCR prod2 重组质粒 simple pMD-18T/sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2，pET28a/ssIL-13Rα2 酶切鉴定将重组质粒经 NdeⅠ和 SalⅠ双酶切后，1%琼脂糖凝胶电泳结果显一条大小与 sTGF-β1 RII、sIL-13Rα2 扩增条带迁移率相同的电泳条谱与预期一致，如图 3、4、5、6 所示。bp 1 2bp 1 2


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