异种CD154基因疫苗抗肝纤维化作用的研究

发布时间：2021-03-18 12:16

　　目的 在自身免疫性肝炎和一些病毒性肝炎引起的肝纤维化的发病过程中,激活的免疫细胞及其分泌的细胞因子对肝脏组织直接或间接的破坏作用是一个重要的原因。CD154与其受体CD40的相互作用是调节体液免疫和细胞免疫的关键因素之一,通过阻断CD40-CD154之间的信号传导已用于一些肺的炎症与纤维化、自身免疫性疾病和动脉粥样硬化症。本研究设想利用表达人的CD154分子的真核表达质粒作为疫苗,免疫小鼠产生抗自身CD154分子的抗体,以阻断CD40-CD154信号,起到抑制细胞免疫及细胞因子分泌,以减轻由反复注射刀豆素蛋白（Concanavalin A, Con A）诱导的肝纤维化的形成。方法 采用重组异种同源人的CD154真核表达质粒（pORF-hCD154,p-hCD154）做DNA疫苗,同时用表达小鼠自身的CD154质粒（pORF-mCD154,p-mCD154）以及空质粒（pORF-mcs,p-c）做为同种及空白对照。首先体外转染真核细胞鉴定这些质粒在真核细胞中的产生CD154的能力。大肠杆菌扩增大量制备去除内毒素的DNA疫苗。Balb/c小鼠尾静脉反复注射Con A诱导肝纤维化形成,同时给... 

【文章来源】：四川大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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转染质粒的COS一1细胞RT一PCR鉴定收集转染p一hCD154(h)和p一meD154(m)质粒后72h的Cos一z细胞用Tnzol试剂

四川大学博士学位论文.2.22p一hcD154减轻肝纤维化的形成为进一步了解注射p一hcD154DNA疫苗后肝组织结构的的变化，我们在第6次注射ConA后一周断颈处死小鼠，取出肝组织。和p一hCD154组小鼠比较，其余3组小鼠的肝脏体积均增大，表面不光滑，可见小结节状增生。10%中性甲醛、石蜡包埋、切片后，常规HE染色。镜下观察发现经p一hcD154DNA疫苗治疗组的小鼠的肝脏均小叶结构基本完

四川大学博士学位论文整，肝细胞排列整齐，无明显变性坏死，肝组织淋巴细胞浸润较少。而p一mCD154、p一c及生理盐水组的小鼠肝脏组织小叶破坏较明显，结构紊乱，肝细胞减少，有点状坏死，汇管区增大，在肝间质可看到大量的淋巴细胞浸润(如图5)。该研究结果说明注射DNA疫苗p一hCD154组小鼠与注射p一mCD154、p一c及生理盐水组小鼠相比较明显减少ConA引起的肝组织内淋巴细胞浸润及肝组织结构的破坏，减轻了反复注射CnoA引起的肝纤维化的形成与发展。.2.23p一hCD154减少了肝组织内胶原的形成在肝纤维化的发展过程中，HSCs的激活产生大量的ECM，其中主


本文编号：3088305