小环载体介导的siRNA稳定抑制乙肝病毒的复制和表达

发布时间：2021-04-21 20:52

　　siRNA（small interfering RNA）是RNA干扰发挥效应的必须因子，它是一类长约21-25nt的非编码小RNA分子，由Dicer酶剪切加工而成。siRNA是RISC （RNA-induced silencing complex）的主要成员，能够激发与之互补的目标mRNA沉默，参与转录后基因表达的调控。siRNA已被证实能够在许多生物学过程中起重要作用，然而目前面临的最主要问题是如何将siRNA片段导入到靶细胞中，让其安全、高效、稳定地表达目的基因。本研究尝试构建表达siRNA的小环载体，并初步鉴定其对乙肝病毒（hepatitis B virus， HBV）复制及其基因表达的抑制作用。设计并合成靶向HBV S区的siRNA，将其克隆到小环载体pMC.BESPX-MCS2上，测序正确后将重组体pMC-H1-siHBS-U6转化入感受态E.coliZYCY10P3S2T，然后在培养基中加入L-阿拉伯糖，诱导其降解细菌骨架，获取只含有目的基因表达盒的小环RNA干扰载体pmc-H1-siHBS-U6。将小环RNA干扰载体与HBV的真核表达质粒pHBV1.3共转染人肝癌细胞Hu... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 小环 RNA 干扰载体 pmc-H1-siHBS-U6 的构建及鉴定
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 实验结果
第二部分 pmc-H1-siHBS-U6 对乙肝病毒复制和表达的抑制作用
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 实验结果
讨论
全文总结
文献综述
参考文献
致谢
硕士期间发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]Combination of small interfering RNAs mediates greater inhibition of human hepatitis B virus replication and antigen expression[J]. 陈喆,许则丰,叶景佳,姚航平,郑树,丁佳逸.  Journal of Zhejiang University Science. 2005(04)
[2]Cost-effective method of siRNA preparation and its application to inhibit hepatitis B virus replication in HepG2 cells[J]. Zhi-Kang Qian, Bao-Qin Xuan, Tai-Shan Min, Jian-Feng Xu, Lin Li, Wei-Da Huang, Department of Biochemistry, School of Life Sciences, Fudan University, 220 Handan Road, Shanghai 200433, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(09)
[3]RNA干扰技术抑制A549细胞表皮生长因子受体表达的研究[J]. 张敏,张新,白春学,陈杰,MinQ.Wei.  中华肿瘤杂志. 2004(12)
[4]病毒性肝炎防治方案[J].   中华传染病杂志. 2001(01)



本文编号：3152470