Kv1.3介导巨噬细胞功能对小鼠肝纤维化的保护作用及其部分机制研究
发布时间：2021-05-07 20:23
肝纤维化（Hepatic Fibrosis）是指肝脏在各种慢性炎症或损伤的持续刺激下发生的肝脏内纤维结缔组织异常增生。目前认为肝纤维化的形成机制是各种致病因子造成肝细胞损伤,引起肝枯否细胞（Kupffer Cells,KCs）、血小板、肝窦状内皮细胞和肝细胞等激活,分泌多种细胞因子（Cytokine）与化学递质共同作用于肝星状细胞（Hepatic Stellate Cells,HSCs）,使其激活和增殖并最终分化成肌成纤维细胞。巨噬细胞在慢性肝脏损伤病理中发挥着核心作用,研究表明不同巨噬细胞亚型已经被证实在肝纤维化的进展中发挥着关键性的调节因素,在肝脏损伤的进展和恢复过程中发挥着不同的功能,巨噬细胞或者KCs分泌的细胞因子是肝纤维化进展的重要调节因子。另外,小鼠外周单核巨噬细胞迁移浸润是肝脏炎症和纤维化进展的关键因素。电压依赖性钾离子通道亚型1.3（Kv1.3）作为电压依赖性钾离子通道家族的成员,参与纤维化等多种疾病的发生和发展,且与调节免疫细胞功能的关系密切。Kv1.3表达于多种组织和细胞中,尤其在免疫细胞中高表达。它最初是在T淋巴细胞中发现的,是调节T细胞活性和分化的重要因素。目前...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中英文缩写词对照
中文摘要
Abstract
1.前言
2.材料及方法
2.1 药品与试剂
2.1.1 抗体
2.1.2 主要试剂和药品
2.2 实验细胞株
2.3 仪器与设备
2.4 实时荧光定量PCR引物序列
2.5 图像及数据处理分析软件
2.6 实验方法
2.6.1 小鼠肝纤维化模型
2.6.2 小鼠血清和组织收集
2.6.3 小鼠肝脏组织蜡片制作
2.6.4 苏木精-伊红(H&E)染色
2.6.5 小鼠肝组织Masson染色
2.6.6 天狼猩红(Sirius red)染色
2.6.7 免疫组化染色
2.6.8 ELISA测定细胞因子的含量
2.6.9 实时荧光定量PCR
2.6.10 Western Blot实验
2.6.11 RNA-seq
2.6.12 小RNA干扰和质粒转染
2.6.13 细胞划痕实验
2.6.14 Transwell实验
2.6.15 正常大鼠腹腔巨噬细胞电生理特征记录
2.6.16 Kv1.3过表达及沉默
2.6.17 统计学分析
3.结果
3.1 全细胞膜片钳技术记录正常大鼠巨噬细胞电生理特征
3.1.1 正常大鼠腹腔巨噬细胞电生理特征和动力学参数
3.1.2 钾通道阻断剂对正常大鼠腹腔巨噬细胞电流的影响
3.1.3 钾通道选择性阻断剂MgTX对正常大鼠腹腔巨噬细胞电流的影响
3.2 Mg TX减轻CCL4 诱导的肝纤维化
3.2.1 Kv1.3在CCL4诱导的肝纤维化小鼠肝脏的表达
3.2.2 MgTX减轻肝纤维化小鼠的病理特征
3.3 MgTX对肝纤维化小鼠保护作用
3.3.1 Mg TX降低肝纤维化组织中α-SMA和胶原I的表达
3.3.2 Mg TX减轻CCL4 引起的肝纤维化相关蛋白的表达
3.3.3 MgTX影响肝纤维化小鼠血清中细胞因子的含量
3.4 MgTX对肝纤维化小鼠的作用机制
3.4.1 Mg TX对 RAW264.7 细胞株中相关蛋白表达的影响
3.4.2 MgTX对巨噬细胞表型的影响
3.4.3 Mg TX通过STAT1/STAT6 信号通路调节巨噬细胞株表型
3.5 MgTX影响巨噬细胞的迁移及机制
3.5.1 MgTX抑制巨噬细胞的迁移
3.5.2 Mg TX靶向降低巨噬细胞中δ-catenin表达
3.5.3 Mg TX降低δ-catenin表达并具有剂量依赖性
3.5.4 δ-catenin表达变化影响巨噬细胞的迁移
3.5.5 δ-catenin调节迁移相关信号蛋白Rho A的表达
4.讨论
5.结论
6.参考文献
附录
致谢
综述 Kv1.3 的生物学特性及在肝脏疾病中的作用进展
参考文献
本文编号：3174004
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
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中英文缩写词对照
中文摘要
Abstract
1.前言
2.材料及方法
2.1 药品与试剂
2.1.1 抗体
2.1.2 主要试剂和药品
2.2 实验细胞株
2.3 仪器与设备
2.4 实时荧光定量PCR引物序列
2.5 图像及数据处理分析软件
2.6 实验方法
2.6.1 小鼠肝纤维化模型
2.6.2 小鼠血清和组织收集
2.6.3 小鼠肝脏组织蜡片制作
2.6.4 苏木精-伊红(H&E)染色
2.6.5 小鼠肝组织Masson染色
2.6.6 天狼猩红(Sirius red)染色
2.6.7 免疫组化染色
2.6.8 ELISA测定细胞因子的含量
2.6.9 实时荧光定量PCR
2.6.10 Western Blot实验
2.6.11 RNA-seq
2.6.12 小RNA干扰和质粒转染
2.6.13 细胞划痕实验
2.6.14 Transwell实验
2.6.15 正常大鼠腹腔巨噬细胞电生理特征记录
2.6.16 Kv1.3过表达及沉默
2.6.17 统计学分析
3.结果
3.1 全细胞膜片钳技术记录正常大鼠巨噬细胞电生理特征
3.1.1 正常大鼠腹腔巨噬细胞电生理特征和动力学参数
3.1.2 钾通道阻断剂对正常大鼠腹腔巨噬细胞电流的影响
3.1.3 钾通道选择性阻断剂MgTX对正常大鼠腹腔巨噬细胞电流的影响
3.2 Mg TX减轻CCL4 诱导的肝纤维化
3.2.1 Kv1.3在CCL4诱导的肝纤维化小鼠肝脏的表达
3.2.2 MgTX减轻肝纤维化小鼠的病理特征
3.3 MgTX对肝纤维化小鼠保护作用
3.3.1 Mg TX降低肝纤维化组织中α-SMA和胶原I的表达
3.3.2 Mg TX减轻CCL4 引起的肝纤维化相关蛋白的表达
3.3.3 MgTX影响肝纤维化小鼠血清中细胞因子的含量
3.4 MgTX对肝纤维化小鼠的作用机制
3.4.1 Mg TX对 RAW264.7 细胞株中相关蛋白表达的影响
3.4.2 MgTX对巨噬细胞表型的影响
3.4.3 Mg TX通过STAT1/STAT6 信号通路调节巨噬细胞株表型
3.5 MgTX影响巨噬细胞的迁移及机制
3.5.1 MgTX抑制巨噬细胞的迁移
3.5.2 Mg TX靶向降低巨噬细胞中δ-catenin表达
3.5.3 Mg TX降低δ-catenin表达并具有剂量依赖性
3.5.4 δ-catenin表达变化影响巨噬细胞的迁移
3.5.5 δ-catenin调节迁移相关信号蛋白Rho A的表达
4.讨论
5.结论
6.参考文献
附录
致谢
综述 Kv1.3 的生物学特性及在肝脏疾病中的作用进展
参考文献
本文编号：3174004
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3174004.html
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