PGAM5/Caspase-1介导细胞焦亡参与肝脏缺血再灌注损伤的机制研究

发布时间：2021-06-11 12:03

　　目的:主要研究在小鼠肝脏缺血再灌注损伤的过程中,PGAM5与Caspase-1表达对细胞焦亡活性的变化,探讨PGAM5/Caspase-1调控细胞焦亡对缺血再灌注处理诱导肝脏细胞损伤的影响。方法:对于体内实验,我们喂养C57小鼠并建立肝脏缺血再灌注模型,通过HE染色和免疫组织化学的方法检测小鼠肝组织是否有气球样变、炎性浸润、淤血和坏死等病理学的变化,用实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝脏IRI中PGAM5 mRNA的表达,用末端尿苷-镍标记（TUNEL）凋亡染色的方法检测AML12细胞的凋亡情况,用免疫印迹技术检测PGAM5、Caspase-1、GSDMD、NLRP3等细胞焦亡和炎症因子的蛋白表达量;对于体外实验,我们体外培养肝脏AML12细胞,分小组转染PGAM5 siRNA质粒和Caspase-1因子抑制剂,并创建肝脏缺血缺氧再灌注损伤的模型,细胞蛋白提取之后,通过免疫印迹（western blot）技术检测各细胞焦亡因子蛋白的表达量,通过细胞免疫荧光来检测肝脏AML12细胞焦亡因子表达的强弱。结果:在C57小鼠肝脏缺血再灌注中,通过HE染色观察发现,Blank组的老鼠肝脏组... 

【文章来源】：河南科技大学河南省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 肝脏缺血再灌注损伤的概述
    1.2 肝脏缺血再灌注损伤的发生机制
        1.2.1 肝脏缺血再灌注损伤的相关信号通路
    1.3 细胞焦亡
        1.3.1 细胞焦亡的途径
    1.4 细胞焦亡与缺血再灌注损伤
第2章 前言
第3章 材料与方法
    3.1 实验相关材料
        3.1.1 实验级动物
        3.1.2 实验细胞
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 实验试剂
        3.1.5 试剂配方
    3.2 实验方法
        3.2.1 qRT-PCR法检测肝脏(IRI)中PGAM5mRNA在每个时间段的表达
        3.2.2 HE染色和免疫组化检测
        3.2.3 TUNEL一步法凋亡试剂盒检测肝组织的凋亡情况
        3.2.4 细胞培养与处理
        3.2.5 qRT-PCR和免疫印迹法检测PGAM5siRNA和 si-NC的表达水平
        3.2.6 细胞上清液的采集及生化指标的测定
        3.2.7 免疫印迹法检测在肝脏(IRI)中细胞焦亡因子在各分组中的表达情况
        3.2.8 通过免疫荧光检测肝脏(IRI)中细胞焦亡因子在各分组中的表达
        3.2.9 实验数据的统计学分析
第4章 结果
    4.1 用qRT-PCR法检测肝脏(IRI)中PGAM5mRNA在各个时间段的表达量
    4.2 HE染色观察C57 小鼠肝脏缺血再灌注损伤后的组织结构病理学变化
    4.3 免疫组织化学染色观察肝脏(IRI)后,细胞焦亡因子在肝脏中的表达
    4.4 TUNEL凋亡试剂盒检测肝组织在肝(IRI)中各时间段的凋亡情况
    4.5 qRT-PCR和免疫印迹法检测PGAM5siRNA和 PGAM5si-NC蛋白的表达
    4.6 在C57 小鼠肝脏缺血再灌注损伤中检测细胞上清液在各时间段的变化
    4.7 免疫印迹法检测在肝脏(IRI)中细胞焦亡因子在各分组中的表达情况
    4.8 免疫荧光检测肝脏(IRI)中细胞焦亡因子在各分组中的平均荧光表达强度
第5章 讨论
    5.1 PGAM5 对细胞焦亡的影响
    5.2 Caspase-1 对细胞焦亡的影响
    5.3 PGAM5与Caspase-1 对细胞焦亡的影响
    5.4 细胞焦亡在肝脏缺血再灌注损伤中的影响
    5.5 问题与展望
第6章 结论
参考文献
缩略词语词汇表
附录
致谢
攻读学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞焦亡在眼部疾病中的研究进展[J]. 张敏,李志坚,王亚敏.  眼科新进展. 2019(01)
[2]细胞焦亡与感染性疾病研究进展[J]. 游宇来,王涛,龚建平.  检验医学与临床. 2018(24)
[3]肝脏缺血再灌注损伤分子机制的研究进展[J]. 赖金惠,刘忠忠,李玲,钟自彪,叶少军,王彦峰,叶啟发.  中华移植杂志(电子版). 2018(04)
[4]细胞焦亡的研究进展[J]. 王星星,宋虎,杜晨阳,王振,张建军.  天津医药. 2018(11)
[5]微小RNA-182-5p调控焦亡参与肝缺血再灌注损伤[J]. 杜晨阳,宋虎,王星星,王振,张建军.  天津医药. 2018(10)
[6]天麻素对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 袁博,瞿思铭,吴朴,张洪斌,黄汉飞,曾仲,晋力.  中华肝胆外科杂志. 2018 (09)
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[8]细胞焦亡信号转导机制及其在肾脏疾病发病中作用的研究进展[J]. 刘建铭,曹灵.  山东医药. 2018(30)
[9]NLRP3炎症小体在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时细胞焦亡中的作用[J]. 邱珍,夏中元,雷少青,赵博,吴洋.  中华麻醉学杂志. 2018 (06)
[10]细胞焦亡在糖尿病心肌缺血再灌注损伤的变化及作用机制[J]. 邱珍,夏中元,周斌,吴洋,孟庆涛,冷燕.  武汉大学学报(医学版). 2017(01)

博士论文
[1]丁苯酞通过抑制PGAM5介导的坏死性凋亡对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠发挥保护作用[D]. 王颖.河北医科大学 2018



本文编号：3224499