鼠李糖乳杆菌效应蛋白HM0539预防大肠杆菌O157：H7肠道感染的效果及机制研究
发布时间：2021-06-20 15:58
一、研究背景和目的大肠杆菌 O157:H7（Enterohaemorrhagic E.coli O157:H7,EHEC O157:H7 O157:H7）是一种高度传染性的食源性病原体,可引起严重的胃肠道疾病,对人类健康造成潜在的严重威胁。目前对EHEC O157:H7感染缺乏有效的治疗方案,抗生素治疗并没有改善EHEC O157:H7引起的肠炎病程,甚至会增加并发肾溶血性尿毒综合症（Hemolytic-uremic syndrome,HUS）的危险。因此,目前亟需转变策略,发展以预防为主的防控手段,以减少EHEC O157:H7感染带来的疾病和经济负担。鼠李糖乳杆菌GG株（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）活菌本身及其代谢物都是目前研究得最为深入的益生菌。我们先前的研究表明LGG培养上清液（LGG culture supernatant,LCS）可促进新生大鼠肠道屏障功能的发育和完善,并增强其对大肠杆菌K1株感染的抵抗力;利用高效液相色谱-串联质谱分析技术,我们鉴定出LCS中潜在的生物活性蛋白（命名为HM0539）,并发现其对肠屏障功能有益。但是HM053...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２不同处理条件下ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７对细胞黏蛋白表达的影响：（Ａ）黏蛋白ＰＡＳ定量分??析；（Ｂ）?ＭＵＣ２蛋白免疫印迹分析；（Ｃ）?ＩｍａｇｅＪ半定量分析ＭＵＣ２；?（Ｄ）?ＭＵＣ２免疫荧??光分析
第一章ＨＭ０５３９蛋白预防大肠杆菌０１５７：Ｈ７损伤肠道屏障的体外研究??方法同１．２．１１，直观检测ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的表达情况。根据结果（图３－Ａ，３－Ｂ；??图３－Ｃ，?３－Ｄ）所示，免疫印迹实验显示ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７的感染降低了?ＨＴ－２９中??Ｚ０－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的表达，而经ＨＭ０５３９的处理，可明显抑制ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７对??ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ表达的下调作用；根据（图３－Ｅ，３－Ｆ）所示，免疫荧光实验显示??ＮＣ组和ＨＭ０５３９组的ＨＴ－２９细胞间紧密连接完善，ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ线条清晰无??断裂，呈“网格”状；ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７感染后，紧密连接发生断裂；而经ＨＭ０５３９??的处理可抑制ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７对ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的破坏作用。以上的研宄结果??表明，ＨＭ０５３９可以抑制ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７对ＨＴ－２９细胞间紧密连接蛋白的破坏。??Ａ?一＿?Ｂ?兰１．５］?丁?＊??—Ｈ：Ｄｌｎｌ??Ｃ?＾?Ｄ?／??Ｏｃｃｌｕｄｉｎ?一?？?｜｜?２。＿??Ｐａｃｌｉｎ?？????ｉｓ１５＇?ｉ?ｉｆａ?ＪＬ??＂ｖ?？：ｉＭ??＾?令／夕／??Ｅ?Ｆ??＿＿??ｉ?ＩＢ??图１－３不同处理条件下ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７对细胞间紧密连接蛋白ＺＯ－ｌ和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ表达的影响：??２４??
?领士学位论文???将小鼠随机分成４组（ＮＣ组、ＨＭ０５３９组、ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７组、??ＨＭ０５３９＋ＥＨＥＣＯ１５７：Ｈ７组），每组１０只，其处理方法同１．２．４。小鼠在感染ＥＨＥＣ??０１５７：Ｈ７后表现出一系列的症状，如食欲低下、精神萎靡、体重明显下降，而且??ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７组在攻毒后第一天开始出现死亡。我们发现ＨＭ０５３９降低了攻毒??小鼠的死亡率和抑制体重下降（图２－１Ａ，２－１Ｂ）。我们检测ＨＭ０５３９对攻毒小鼠??小肠的影响，发现ＨＭ０５３９抑制了?ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７诱导的空肠绒毛萎缩和隐窝??脓肿（图２－１Ｃ、Ｄ）。??Ａ?Ｂ?０６??１００??？?■?，？?ＮＣ?？?．———?，??Ｉ?＊?ＨＭ０６３９?｜?０４．?Ｔ??Ｉ?Ｌ．Ａｍ?＾??卜?Ｉ?〇，?■?Ｕ??５?ｆ?＾??°！￣ｒ?丁丁１?令?／?妒，??Ｃ?Ｄａｙｓ?Ｄ??－憂臁！變＿?－??｜?｜｜｜?（－?旧丨丨５外丨丨丨丨「??動麵纖麵??图２－１不同处理条件下小鼠感染症状及肠道形态的变化：在ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７诱发的小鼠小??肠结肠炎的病理过程中，ＨＭ０５３９减轻了临床症状和肠道炎症。ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７感染后第７??天，小鼠（ｎ＝?１０／组）的存活率（Ａ）和体重变化（Ｂ）。用ＨＥ染色的空肠的代表性图像（２０〇ｘ），??比较各组小鼠空肠的绒毛变化（Ｃ）和隐窝脓肿（Ｄ）。??Ｆｉｇ?２－１?Ｔｈｅ?Ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ｍｉｃｅ?ｕｎｄｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔ
【参考文献】：
期刊论文
[1]鼠李糖乳杆菌培养上清液通过抑制NF-κB通路预防大肠杆菌性脑膜炎[J]. 曾庆,何肖龙,肖汉森,杜蕾,李雨静,陈乐程,田慧文,黄胜和,曹虹. 南方医科大学学报. 2017(01)
[2]嗜酸乳杆菌抑制大肠杆菌O157:H7肠道定植体内外实验[J]. 林如琴,吴娴波,张益多,李亚文,吴宇桦,范宏英. 实用医学杂志. 2016(16)
[3]Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力[J]. 邱嘉文,何肖龙,张宝,杜蕾,曾庆,李森,熊欢欢,龙敏,罗军,曹虹. 南方医科大学学报. 2016(06)
[4]浙江省首例肠出血性大肠杆菌O157∶H7菌株的分离和鉴定[J]. 孟冬梅,孙建荣,许珂,张燕琴,潘劲草. 中国公共卫生. 1999(04)
博士论文
[1]鼠李糖乳杆菌代谢产物预防新生大鼠大肠杆菌感染的效果和机制研究及有效成分分析[D]. 何肖龙.南方医科大学 2017
硕士论文
[1]双歧杆菌乳杆菌三联活菌片通过提高肠道防御功能预防大肠杆菌K1株感染[D]. 曾庆.南方医科大学 2017
本文编号：3239500
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２不同处理条件下ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７对细胞黏蛋白表达的影响：（Ａ）黏蛋白ＰＡＳ定量分??析；（Ｂ）?ＭＵＣ２蛋白免疫印迹分析；（Ｃ）?ＩｍａｇｅＪ半定量分析ＭＵＣ２；?（Ｄ）?ＭＵＣ２免疫荧??光分析
第一章ＨＭ０５３９蛋白预防大肠杆菌０１５７：Ｈ７损伤肠道屏障的体外研究??方法同１．２．１１，直观检测ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的表达情况。根据结果（图３－Ａ，３－Ｂ；??图３－Ｃ，?３－Ｄ）所示，免疫印迹实验显示ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７的感染降低了?ＨＴ－２９中??Ｚ０－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的表达，而经ＨＭ０５３９的处理，可明显抑制ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７对??ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ表达的下调作用；根据（图３－Ｅ，３－Ｆ）所示，免疫荧光实验显示??ＮＣ组和ＨＭ０５３９组的ＨＴ－２９细胞间紧密连接完善，ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ线条清晰无??断裂，呈“网格”状；ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７感染后，紧密连接发生断裂；而经ＨＭ０５３９??的处理可抑制ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７对ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的破坏作用。以上的研宄结果??表明，ＨＭ０５３９可以抑制ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７对ＨＴ－２９细胞间紧密连接蛋白的破坏。??Ａ?一＿?Ｂ?兰１．５］?丁?＊??—Ｈ：Ｄｌｎｌ??Ｃ?＾?Ｄ?／??Ｏｃｃｌｕｄｉｎ?一?？?｜｜?２。＿??Ｐａｃｌｉｎ?？????ｉｓ１５＇?ｉ?ｉｆａ?ＪＬ??＂ｖ?？：ｉＭ??＾?令／夕／??Ｅ?Ｆ??＿＿??ｉ?ＩＢ??图１－３不同处理条件下ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７对细胞间紧密连接蛋白ＺＯ－ｌ和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ表达的影响：??２４??
?领士学位论文???将小鼠随机分成４组（ＮＣ组、ＨＭ０５３９组、ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７组、??ＨＭ０５３９＋ＥＨＥＣＯ１５７：Ｈ７组），每组１０只，其处理方法同１．２．４。小鼠在感染ＥＨＥＣ??０１５７：Ｈ７后表现出一系列的症状，如食欲低下、精神萎靡、体重明显下降，而且??ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７组在攻毒后第一天开始出现死亡。我们发现ＨＭ０５３９降低了攻毒??小鼠的死亡率和抑制体重下降（图２－１Ａ，２－１Ｂ）。我们检测ＨＭ０５３９对攻毒小鼠??小肠的影响，发现ＨＭ０５３９抑制了?ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７诱导的空肠绒毛萎缩和隐窝??脓肿（图２－１Ｃ、Ｄ）。??Ａ?Ｂ?０６??１００??？?■?，？?ＮＣ?？?．———?，??Ｉ?＊?ＨＭ０６３９?｜?０４．?Ｔ??Ｉ?Ｌ．Ａｍ?＾??卜?Ｉ?〇，?■?Ｕ??５?ｆ?＾??°！￣ｒ?丁丁１?令?／?妒，??Ｃ?Ｄａｙｓ?Ｄ??－憂臁！變＿?－??｜?｜｜｜?（－?旧丨丨５外丨丨丨丨「??動麵纖麵??图２－１不同处理条件下小鼠感染症状及肠道形态的变化：在ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７诱发的小鼠小??肠结肠炎的病理过程中，ＨＭ０５３９减轻了临床症状和肠道炎症。ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７感染后第７??天，小鼠（ｎ＝?１０／组）的存活率（Ａ）和体重变化（Ｂ）。用ＨＥ染色的空肠的代表性图像（２０〇ｘ），??比较各组小鼠空肠的绒毛变化（Ｃ）和隐窝脓肿（Ｄ）。??Ｆｉｇ?２－１?Ｔｈｅ?Ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ｍｉｃｅ?ｕｎｄｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔ
【参考文献】：
期刊论文
[1]鼠李糖乳杆菌培养上清液通过抑制NF-κB通路预防大肠杆菌性脑膜炎[J]. 曾庆,何肖龙,肖汉森,杜蕾,李雨静,陈乐程,田慧文,黄胜和,曹虹. 南方医科大学学报. 2017(01)
[2]嗜酸乳杆菌抑制大肠杆菌O157:H7肠道定植体内外实验[J]. 林如琴,吴娴波,张益多,李亚文,吴宇桦,范宏英. 实用医学杂志. 2016(16)
[3]Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力[J]. 邱嘉文,何肖龙,张宝,杜蕾,曾庆,李森,熊欢欢,龙敏,罗军,曹虹. 南方医科大学学报. 2016(06)
[4]浙江省首例肠出血性大肠杆菌O157∶H7菌株的分离和鉴定[J]. 孟冬梅,孙建荣,许珂,张燕琴,潘劲草. 中国公共卫生. 1999(04)
博士论文
[1]鼠李糖乳杆菌代谢产物预防新生大鼠大肠杆菌感染的效果和机制研究及有效成分分析[D]. 何肖龙.南方医科大学 2017
硕士论文
[1]双歧杆菌乳杆菌三联活菌片通过提高肠道防御功能预防大肠杆菌K1株感染[D]. 曾庆.南方医科大学 2017
本文编号：3239500
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