KLF11作为一个关键的转录因子调节小鼠肝脏脂代谢的分子机制研究

发布时间：2021-06-23 13:54

　　脂肪肝这一疾病的发生与代谢综合征有着非常紧密的联系,例如Ⅱ型糖尿病和肥胖病等疾病。相关研究表明在人的KLF11基因上发生错义突变后将会导致糖尿病的发生,这主要是由于KLF基因发生错义突变后使得胰腺中胰岛素的生物合成发生了障碍,不能有效的合成胰岛素。然而,直到目前为止小鼠KLF11基因在外周组织中的作用还不是很清楚。我们的研究证实转录因子KLF11在db/db Ⅱ型糖尿病小鼠和高脂饮食诱导的肥胖鼠（D1O）的肝组织中mRNA表达水平与对照组相比都有较显著的降低。并在以上两种模型小鼠肝组织中通过腺病毒介导的过表达KLF11基因后能够有效的激活PPARa的信号通路,从而明显的改善脂肪肝症状。同时在db/db II型糖尿病小鼠中过表达KLF11基因也能够抑制脂合成基因的表达,如SREBP-1c、FAS和ACC。除此之外,KLF11基因在db/dbⅡ型糖尿病小鼠肝中也可以显著抑制糖异生基因的表达,如PGC-1α、PEPCK和G6pase,从而降低db/db Ⅱ型糖尿病小鼠的血糖水平和改善葡萄糖的耐受性以及增加胰岛素的敏感性。反之,在db/m和野生型C57BL/6J小鼠肝组织中通过腺病毒介导的sh... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1.实验材料
        1.1. 实验动物
        1.2. 菌株和细胞系
        1.3. 质粒载体
        1.4. 工具酶及分子量标准
        1.5. 试剂盒
        1.6. 主要化学试剂(按试剂公司分类)
        1.7. 主要仪器及设备
        1.8. 分析软件
        1.9. 引物序列
    2. 实验方法
        2.1. 质粒载体的构建
        2.2 细胞培养
        2.3. 细胞瞬时转染
        2.4. 双荧光素酶报告实验测定启动子活性
        2.5. 总RNA提取及cDNA合成
        2.6. Real-Time PCR实验
        2.7. Western blot
        2.8. 重组腺病毒的构建与包装
        2.9. 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒
        2.10. 腺病毒纯化后滴度的测定
        2.11. 小鼠肝原代细胞的分离以及培养
        2.12. 肝原代细胞葡萄糖output试验
        2.13. 小鼠尾静脉注射腺病毒以及葡萄糖耐受试验测定(GTT)
        2.14. 胰岛素耐受试验测定(ITT)
        2.15. 小鼠血清总酮体测定
        2.16. 小鼠生化、生理指标的测定
        2.17. 统计分析
结果
    一.小鼠肝脏中KLF11基因的表达水平受营养状态的调控,并且在db/db Ⅱ型糖尿病鼠和高脂饮食诱导的肥胖小鼠中KLF11基因的表达水平下降
    二.KLF11基因抑制小鼠SREBP-1c基因的启动子活性
    三.在DIO和db/dbⅡ型糖尿病小鼠肝脏组织中过表达KLF11基因改善了脂肪肝症状和提高了机体的葡萄糖耐受性
    四.在db/m小鼠和野生型C57BL/6J小鼠肝组织中特异性敲低KLF11基因后破坏了肝脏脂代谢平衡
    五.在小鼠肝原代细胞中KLF11基因可以调节糖脂代谢相关基因的表达
    六.PPARα介导了小鼠KLF11基因对细胞水平和动物肝组织内甘油三酯含量的影响
讨论
小结
参考文献
附录
综述
    References
致谢
作者简介
攻读博士期间发表的学术论文



本文编号：3245057