ZAG对棕榈酸诱导的HepG2细胞内甘油三酯沉积的影响及机制
发布时间：2021-07-07 20:26
目的：构建重组人ZAG（Zinc-α2glycoprotein）真核表达载体，并瞬时转染HepG2细胞，观察HepG2细胞过表达ZAG后对棕榈酸诱导的甘油三酯沉积的影响。方法：提取HepG2细胞总RNA，通过RT-PCR方法扩增出ZAG序列，克隆入经XhoI和SacII双酶切后的pIRES2-ZsGreen1，重组人ZAG真核表达质粒（pIRES2-ZsGreen1-hZAG）通过核苷酸测序鉴定。使用不同浓度pIRES2-ZsGreen1-hZAG的经脂质体转染HepG2细胞24小时，western-blotting鉴定ZAG阳性细胞，并采用棕榈酸诱导该细胞脂肪变性，采用油红O染色观察各组细胞内脂滴情况，酶联免疫法检测细胞内甘油三酯的水平。结果：1.成功构建人ZAG基因的真核表达载体pIRES2-ZsGreen1-hZAG，该载体转染HepG2细胞后，能显著增加ZAG蛋白的表达。2.与对照组相比，过表达ZAG的HepG2细胞能减少棕榈酸诱导的细胞内甘油三酯含量；油红O染色结果显示过表达ZAG的HepG2细胞在棕榈酸诱导后细胞内橘红色脂滴较对照组HepG2细胞明显减少。结论：1.构建了Z...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pIRES2-ZsGreen1质粒结构图
3.1 重组质粒的 DNA 测序分析对重组质粒pIRES2-ZsGreen1-hZAG进行核苷酸序列测定，证实hZAG定向插入真核表达载体中（图2）图 2： 重组质粒pIRES2-ZsGreen1-hZAG核苷酸序列分析部分序列图3.2 pIRES2-ZsGreen1-hZAG瞬时转染HepG2细胞荧光表达情况使用 pIRES2-ZsGreen1–hZAG 重组质粒瞬时转染 HepG2 细胞 12 小时，于荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况，结果显示视野下可见大量绿色荧光，表明pIRES2-ZsGreen1–hZAG 重组质粒成功转入 HepG2 细胞内，并指导 ZsGreen1 蛋白表达。
28图3: 重组质粒pIRES2-ZsGreen1-hZAG转染HepG2细胞荧光表达图3.3 pIRES2-ZsGreen1-hZAG瞬时转染HepG2细胞的浓度筛选将浓度分别为 1.5μg/ml、2μg/ml、2.5μg/ml、3μg/ml pIRES2-ZsGreen1-hZAG瞬时转染 HepG2 细胞，用 Western-blotting 检测 hZAG 表达情况。结果表明，转染 3μg/ml 的 hZAG 质粒组 ZAG 蛋白表达量最高，因此后续试验选择浓度为3μg/ml 的 pIRES2-ZsGreen1-hZAG 转染 HepG2 细胞。图 4：不同浓度的 hZAG 瞬时转染 HepG2 细胞 ZAG 蛋白的表达* p <0.05 与 Vector 组比较；** p <0.01 与 Vector 组比较。controlvector1.5μg/ml2μg/ml2.5μg/ml3μg/ml0
【参考文献】：
期刊论文
[1]Fatty Acid Synthase and Hormone-sensitive Lipase Expression in Liver Are Involved in Zinc-α2-glycoprotein-induced Body Fat Loss in Obese Mice[J]. Feng-ying Gong,Jie-ying Deng,Hui-juan Zhu,Hui Pan,Lin-jie Wang,and Hong-bo Yang Department of Endocrinology,Key Laboratory of Endocrinology of Ministry of Health,Peking Union Medical College Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Beijing 100730,China. Chinese Medical Sciences Journal. 2010(03)
[2]Non-alcoholic fatty liver disease and the metabolic syndrome:An update[J]. R Scott Rector,John P Thyfault,Jamal A Ibdah. World Journal of Gastroenterology. 2008(02)
[3]Augmenter of liver regeneration promotes hepatocyte proliferation induced by Kupffer cells[J]. Chun-Ping Wang, Lin Zhou, Shu-Hui Su, Yan Chen, Yin-Ying Lu, Fei Wang, Hong-Jun Jia, Yong-Yi Feng, Yong-Ping Yang, Department of Gastroenterology, 302 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100039, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(30)
本文编号：3270313
【文章来源】：南华大学湖南省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pIRES2-ZsGreen1质粒结构图
3.1 重组质粒的 DNA 测序分析对重组质粒pIRES2-ZsGreen1-hZAG进行核苷酸序列测定，证实hZAG定向插入真核表达载体中（图2）图 2： 重组质粒pIRES2-ZsGreen1-hZAG核苷酸序列分析部分序列图3.2 pIRES2-ZsGreen1-hZAG瞬时转染HepG2细胞荧光表达情况使用 pIRES2-ZsGreen1–hZAG 重组质粒瞬时转染 HepG2 细胞 12 小时，于荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况，结果显示视野下可见大量绿色荧光，表明pIRES2-ZsGreen1–hZAG 重组质粒成功转入 HepG2 细胞内，并指导 ZsGreen1 蛋白表达。
28图3: 重组质粒pIRES2-ZsGreen1-hZAG转染HepG2细胞荧光表达图3.3 pIRES2-ZsGreen1-hZAG瞬时转染HepG2细胞的浓度筛选将浓度分别为 1.5μg/ml、2μg/ml、2.5μg/ml、3μg/ml pIRES2-ZsGreen1-hZAG瞬时转染 HepG2 细胞，用 Western-blotting 检测 hZAG 表达情况。结果表明，转染 3μg/ml 的 hZAG 质粒组 ZAG 蛋白表达量最高，因此后续试验选择浓度为3μg/ml 的 pIRES2-ZsGreen1-hZAG 转染 HepG2 细胞。图 4：不同浓度的 hZAG 瞬时转染 HepG2 细胞 ZAG 蛋白的表达* p <0.05 与 Vector 组比较；** p <0.01 与 Vector 组比较。controlvector1.5μg/ml2μg/ml2.5μg/ml3μg/ml0
【参考文献】：
期刊论文
[1]Fatty Acid Synthase and Hormone-sensitive Lipase Expression in Liver Are Involved in Zinc-α2-glycoprotein-induced Body Fat Loss in Obese Mice[J]. Feng-ying Gong,Jie-ying Deng,Hui-juan Zhu,Hui Pan,Lin-jie Wang,and Hong-bo Yang Department of Endocrinology,Key Laboratory of Endocrinology of Ministry of Health,Peking Union Medical College Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Beijing 100730,China. Chinese Medical Sciences Journal. 2010(03)
[2]Non-alcoholic fatty liver disease and the metabolic syndrome:An update[J]. R Scott Rector,John P Thyfault,Jamal A Ibdah. World Journal of Gastroenterology. 2008(02)
[3]Augmenter of liver regeneration promotes hepatocyte proliferation induced by Kupffer cells[J]. Chun-Ping Wang, Lin Zhou, Shu-Hui Su, Yan Chen, Yin-Ying Lu, Fei Wang, Hong-Jun Jia, Yong-Yi Feng, Yong-Ping Yang, Department of Gastroenterology, 302 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100039, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(30)
本文编号：3270313
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