VEGF-C刺激的脂肪间充质干细胞通过调节炎症反应与淋巴管引流减轻TNBS介导的慢性实验性结肠炎
发布时间：2021-07-13 15:01
第一部分:C57BL/6小鼠来源的脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定目的:分离培养C57BL/6小鼠腹股沟脂肪组织中的脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）,并鉴定其生物学特性。方法:无菌切取小鼠腹股沟皮下脂肪组织,采用0.1%I型胶原酶进行消化后用含10%FBS的低糖DMEM培养基贴壁培养小鼠ADSCs,倒置显微镜观察其细胞形态;流式细胞术检测对其表面标记物进行鉴定,行成骨及成脂诱导判断其多向分化潜能。结果:体外分离培养的小鼠ADSCs具有良好的细胞形态、较强的增殖能力,体外具有成脂、成骨分化潜能,表面标记CD29、CD44阳性,Sca-1高表达,不表达CD31。结论:利用该实验方法,能培养出高纯度、具有良好干性的小鼠ADSCs。第二部分:血管内皮生长因子C刺激的ADSCs对小鼠慢性实验性结肠炎的治疗作用及机制研究目的:研究VEGF-C刺激的ADSCs对TNBS诱导的慢性结肠炎的治疗作用并探寻其机制。方法:构建C57BL/6小鼠TNBS诱导的慢性结肠炎模型,随机分为四组:空白对照组（n=5）、TNBS模型组（n=5）、ADSCs干预组（n...
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１倒置显微镜下各阶段ＡＤＳＣｓ形态
ＶＥＧＦ－Ｃ刺激的脂昉间充质干细胞通过调节炎症反应与淋巴管引流减轻ＴＮＢＳ介导的慢性实验性结肠炎第一部分??＿＿??图２ＡＤＳＣＳ多向分化的成脂与成骨诱导。Ａ：成脂诱导后油红０染色（４〇ｘ）?Ｂ：?ＡＤＳＣｓ成骨??诱导后西素红染色（４〇ｘ）??３．３流式细胞术检测ＡＤＳＣｓ的表面标记物??采用流式细胞仪鉴定ＡＤＳＣｓ的表面标记分子ＣＤ２９、ＣＤ４４、Ｓｃａ－１表达。结果显??示阳性率分别为匚０２９?８６．４％士１．４％、００４４?８２．９％士１．１％和５〇３－１９５．５％±１．３°／〇（见图３），??而不表达上皮细胞标记物ＣＤ３１，其阴性率为７７．８％±１．３％，表明培养的ＡＤＳＣｓ纯度??较尚。??Ａ???Ｂ??＃?Ｊ??ＦｔＴＣ－Ａ?５ｕｂｓ？?Ｆ１ＴＣ－Ａ?ｓｕｂｓｅｔ??８８．４?８２９??１?Ｊｌ?－ｌ??ＲＴＣ－Ｃ０２９?ＦＩＴＣ－ＣＤ４４??Ｃ?Ｄ??ＡＰＣ－Ａ?ｓｕｂｓｅｔ??ＡＰＣ－ｆｉ．??７７?Ｓ?Ｉ?１??Ｋ?Ｈ?／?ｌ??ＡＰＣ－ＣＫ３１?ＡＰＣ－ＳＣＡ－１??图３流式细胞仪检测ＡＤＳＣｓ表面蛋白的表达。Ａ－Ｄ分别为ＣＤ２９、ＣＤ４４、??ＣＤ３１及Ｓｃａ－１的蛋白表达情况。??１１??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识[J]. Technical Committee for Mucocutaneous Regeneration and Reconstruction of China Medicinal Biotechnology Association;. 解放军医学杂志. 2018(10)
[2]Adipose-derived stromal cell in regenerative medicine: A review[J]. Reza Tabatabaei Qomi,Mohsen Sheykhhasan. World Journal of Stem Cells. 2017(08)
[3]间充质干细胞与免疫的相互作用:从基础研究到临床应用[J]. 李清,唐笛,王莹,时玉舫. 生命科学. 2016(08)
[4]Mesenchymal stem cells alleviate TNBS-induced colitis by modulating inflammatory and autoimmune responses[J]. Qian-Qian Chen,Li Yan,Chang-Zheng Wang,Wei-Hua Wang,Hui Shi,Bin-Bin Su,Qing-Huan Zeng,Hai-Tao Du,Jun Wan. World Journal of Gastroenterology. 2013(29)
[5]共培养法神经细胞诱导骨髓间充质干细胞向神经元的分化[J]. 杨乃龙,杨芬,徐丽丽. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(29)
本文编号：3282281
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１倒置显微镜下各阶段ＡＤＳＣｓ形态
ＶＥＧＦ－Ｃ刺激的脂昉间充质干细胞通过调节炎症反应与淋巴管引流减轻ＴＮＢＳ介导的慢性实验性结肠炎第一部分??＿＿??图２ＡＤＳＣＳ多向分化的成脂与成骨诱导。Ａ：成脂诱导后油红０染色（４〇ｘ）?Ｂ：?ＡＤＳＣｓ成骨??诱导后西素红染色（４〇ｘ）??３．３流式细胞术检测ＡＤＳＣｓ的表面标记物??采用流式细胞仪鉴定ＡＤＳＣｓ的表面标记分子ＣＤ２９、ＣＤ４４、Ｓｃａ－１表达。结果显??示阳性率分别为匚０２９?８６．４％士１．４％、００４４?８２．９％士１．１％和５〇３－１９５．５％±１．３°／〇（见图３），??而不表达上皮细胞标记物ＣＤ３１，其阴性率为７７．８％±１．３％，表明培养的ＡＤＳＣｓ纯度??较尚。??Ａ???Ｂ??＃?Ｊ??ＦｔＴＣ－Ａ?５ｕｂｓ？?Ｆ１ＴＣ－Ａ?ｓｕｂｓｅｔ??８８．４?８２９??１?Ｊｌ?－ｌ??ＲＴＣ－Ｃ０２９?ＦＩＴＣ－ＣＤ４４??Ｃ?Ｄ??ＡＰＣ－Ａ?ｓｕｂｓｅｔ??ＡＰＣ－ｆｉ．??７７?Ｓ?Ｉ?１??Ｋ?Ｈ?／?ｌ??ＡＰＣ－ＣＫ３１?ＡＰＣ－ＳＣＡ－１??图３流式细胞仪检测ＡＤＳＣｓ表面蛋白的表达。Ａ－Ｄ分别为ＣＤ２９、ＣＤ４４、??ＣＤ３１及Ｓｃａ－１的蛋白表达情况。??１１??
ＶＥＧＦ－Ｃ刺激的脂昉间充质干细胞通过调节炎症反应与淋巴管引流减轻ＴＮＢＳ介导的慢性实验性结肠炎第一部分??＿＿??图２ＡＤＳＣＳ多向分化的成脂与成骨诱导。Ａ：成脂诱导后油红０染色（４〇ｘ）?Ｂ：?ＡＤＳＣｓ成骨??诱导后西素红染色（４〇ｘ）??３．３流式细胞术检测ＡＤＳＣｓ的表面标记物??采用流式细胞仪鉴定ＡＤＳＣｓ的表面标记分子ＣＤ２９、ＣＤ４４、Ｓｃａ－１表达。结果显??示阳性率分别为匚０２９?８６．４％士１．４％、００４４?８２．９％士１．１％和５〇３－１９５．５％±１．３°／〇（见图３），??而不表达上皮细胞标记物ＣＤ３１，其阴性率为７７．８％±１．３％，表明培养的ＡＤＳＣｓ纯度??较尚。??Ａ???Ｂ??＃?Ｊ??ＦｔＴＣ－Ａ?５ｕｂｓ？?Ｆ１ＴＣ－Ａ?ｓｕｂｓｅｔ??８８．４?８２９??１?Ｊｌ?－ｌ??ＲＴＣ－Ｃ０２９?ＦＩＴＣ－ＣＤ４４??Ｃ?Ｄ??ＡＰＣ－Ａ?ｓｕｂｓｅｔ??ＡＰＣ－ｆｉ．??７７?Ｓ?Ｉ?１??Ｋ?Ｈ?／?ｌ??ＡＰＣ－ＣＫ３１?ＡＰＣ－ＳＣＡ－１??图３流式细胞仪检测ＡＤＳＣｓ表面蛋白的表达。Ａ－Ｄ分别为ＣＤ２９、ＣＤ４４、??ＣＤ３１及Ｓｃａ－１的蛋白表达情况。??１１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识[J]. Technical Committee for Mucocutaneous Regeneration and Reconstruction of China Medicinal Biotechnology Association;. 解放军医学杂志. 2018(10)
[2]Adipose-derived stromal cell in regenerative medicine: A review[J]. Reza Tabatabaei Qomi,Mohsen Sheykhhasan. World Journal of Stem Cells. 2017(08)
[3]间充质干细胞与免疫的相互作用:从基础研究到临床应用[J]. 李清,唐笛,王莹,时玉舫. 生命科学. 2016(08)
[4]Mesenchymal stem cells alleviate TNBS-induced colitis by modulating inflammatory and autoimmune responses[J]. Qian-Qian Chen,Li Yan,Chang-Zheng Wang,Wei-Hua Wang,Hui Shi,Bin-Bin Su,Qing-Huan Zeng,Hai-Tao Du,Jun Wan. World Journal of Gastroenterology. 2013(29)
[5]共培养法神经细胞诱导骨髓间充质干细胞向神经元的分化[J]. 杨乃龙,杨芬,徐丽丽. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(29)
本文编号：3282281
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