CD24分子在胆汁淤积性肝纤维化中对巨噬细胞亚群的调控作用
发布时间：2021-09-01 10:50
研究目的:探究CD24分子在小鼠胆总管结扎（BDL）模型所模拟的胆汁淤积性肝纤维化疾病中的作用及其相关分子机制。研究内容与方法:一、观察CD24分子在小鼠BDL模型所致肝纤维化中的作用。分别构建野生型（WT）小鼠与CD24敲除(CD24-/-)小鼠的BDL模型与假手术组（Sham）,在造模后第7天处死。H&E染色观察肝组织损伤变化与炎症状态;血清学谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）显示肝功能变化;天狼猩红（Sirius Red）染色显示肝组织纤维化程度;Western-blot检测肝组织中CD24与α-SMA的蛋白水平表达变化,Real-time PCR检测肝组织中纤维化相关指标以及CD24的mRNA表达变化。二、解析CD24分子在小鼠BDL模型肝脏中对巨噬细胞的调节作用BDL造模后第7天,使用免疫荧光检测肝组织中巨噬细胞与纤维化关系;利用流式细胞术分析不同基因型小鼠造模后肝脏中定居型巨噬细胞(CD11bintnt F4/80hi)、募集型巨噬细胞(CD11bhiF4/80...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD24-/-小鼠BDL诱导的肝纤维化程度更为严重Fig1-2BDL-inducedhepaticfibrosiswasaggravatedafterCD24molecularknockout注释：WT与CD24-/-小鼠BDL造模后第7天，A：H&E染色观察肝组织病理形态改变，箭头表示汇管区增生与炎性细胞增多，图片标尺为100μm；B：血清学检测ALT、AST的表达水平（n=10）；C：SiriusRed染色观察肝纤维化程度
天津医科大学硕士学位论文2.2 结果2.2.1 CD24 敲除后小鼠 BDL 模型肝纤维化加重与巨噬细胞有关已经有大量研究表明，肝内巨噬细胞在肝纤维化的形成中具有重要作用。我们的前期实验结果证实了在急性肝损伤中 CD24 分子对巨噬细胞有调节作用。因此，结合第一部分实验，我们推测是否在小鼠 BDL 模型中，CD24 敲除后肝纤维化加重也与巨噬细胞有关。流式结果表明，巨噬细胞表达 CD24（图 2-1，A）。通过免疫荧光染色我们发现，造模后，在星状细胞活化指标 α-SMA 升高的同时，F4/80 的表达也显著升高，并且高表达 F4/80 的部分集中分布在表达 α-SMA 组织的位置（图 2-1，B），说明巨噬细胞与肝纤维化的形成高度相关。此外，CD24分子敲除后，小鼠 BDL 模型 α-SMA 与 F4/80 的表达更为明显，但两种基因型假手术组没有明显差别（图 2-1，B，C）说明 CD24 对小鼠 BDL 模型所致肝纤维化的调节与巨噬细胞相关。
26图2-2 CD24-/-小鼠BDL模型肝脏中CD11bhiF4/80intLy6Clo巨噬细胞增多更为明显Fig 2-2 The increasing of CD11bhiF4/80intLy6Clomacrophages in CD24-/-mice liverwas more significant after BDL surgery注释：WT 与 CD24-/-小鼠 BDL 手术后第 7 天，小鼠肝脏中：A.排除中性粒细胞（CD45+Ly6G+）后， CD11bintF4/80hi与 CD11bhiF4/80int巨噬细胞的分布与比例的代表性流式图。B.对于图 A 中各群细胞的比例以及各群细胞在每克肝脏中的绝对数统计。（n=8） C. CD11bhiF4/80int中各细胞亚群分布与比例的代表性流式图。D.对于图 C 中各群细胞的比例以及各群细胞在每克肝脏中的绝对数进行统计。（n=8）*P<0.05Note：On day 7 after WT and CD24-/-mouse BDL surgery: A. Representative Flowgraph of the distribution and proportion of F4/80hiCD11bintand F4/80intCD11bhimacrophages after the exclusion of neutrophils(CD45+Ly6G+). B. For the proportion
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pathogenesis and clinical spectrum of primary sclerosing cholangitis[J]. Neelam G Gidwaney,Swati Pawa,Kiron M Das. World Journal of Gastroenterology. 2017(14)
[2]Genetic epidemiology of primary sclerosing cholangitis[J]. Tom H Karlsen,Erik Schrumpf,Kirsten Muri Boberg. World Journal of Gastroenterology. 2007(41)
本文编号：3376846
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD24-/-小鼠BDL诱导的肝纤维化程度更为严重Fig1-2BDL-inducedhepaticfibrosiswasaggravatedafterCD24molecularknockout注释：WT与CD24-/-小鼠BDL造模后第7天，A：H&E染色观察肝组织病理形态改变，箭头表示汇管区增生与炎性细胞增多，图片标尺为100μm；B：血清学检测ALT、AST的表达水平（n=10）；C：SiriusRed染色观察肝纤维化程度
天津医科大学硕士学位论文2.2 结果2.2.1 CD24 敲除后小鼠 BDL 模型肝纤维化加重与巨噬细胞有关已经有大量研究表明，肝内巨噬细胞在肝纤维化的形成中具有重要作用。我们的前期实验结果证实了在急性肝损伤中 CD24 分子对巨噬细胞有调节作用。因此，结合第一部分实验，我们推测是否在小鼠 BDL 模型中，CD24 敲除后肝纤维化加重也与巨噬细胞有关。流式结果表明，巨噬细胞表达 CD24（图 2-1，A）。通过免疫荧光染色我们发现，造模后，在星状细胞活化指标 α-SMA 升高的同时，F4/80 的表达也显著升高，并且高表达 F4/80 的部分集中分布在表达 α-SMA 组织的位置（图 2-1，B），说明巨噬细胞与肝纤维化的形成高度相关。此外，CD24分子敲除后，小鼠 BDL 模型 α-SMA 与 F4/80 的表达更为明显，但两种基因型假手术组没有明显差别（图 2-1，B，C）说明 CD24 对小鼠 BDL 模型所致肝纤维化的调节与巨噬细胞相关。
26图2-2 CD24-/-小鼠BDL模型肝脏中CD11bhiF4/80intLy6Clo巨噬细胞增多更为明显Fig 2-2 The increasing of CD11bhiF4/80intLy6Clomacrophages in CD24-/-mice liverwas more significant after BDL surgery注释：WT 与 CD24-/-小鼠 BDL 手术后第 7 天，小鼠肝脏中：A.排除中性粒细胞（CD45+Ly6G+）后， CD11bintF4/80hi与 CD11bhiF4/80int巨噬细胞的分布与比例的代表性流式图。B.对于图 A 中各群细胞的比例以及各群细胞在每克肝脏中的绝对数统计。（n=8） C. CD11bhiF4/80int中各细胞亚群分布与比例的代表性流式图。D.对于图 C 中各群细胞的比例以及各群细胞在每克肝脏中的绝对数进行统计。（n=8）*P<0.05Note：On day 7 after WT and CD24-/-mouse BDL surgery: A. Representative Flowgraph of the distribution and proportion of F4/80hiCD11bintand F4/80intCD11bhimacrophages after the exclusion of neutrophils(CD45+Ly6G+). B. For the proportion
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pathogenesis and clinical spectrum of primary sclerosing cholangitis[J]. Neelam G Gidwaney,Swati Pawa,Kiron M Das. World Journal of Gastroenterology. 2017(14)
[2]Genetic epidemiology of primary sclerosing cholangitis[J]. Tom H Karlsen,Erik Schrumpf,Kirsten Muri Boberg. World Journal of Gastroenterology. 2007(41)
本文编号：3376846
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