BMP-2/Smad调控PMVECs肌样分化在HPS肺微血管异常扩张中的作用和机制研究
发布时间：2021-09-12 13:53
背景和目的肝肺综合征（hepatopulmonary syndrome,HPS）是一种慢性肝病的晚期并发症,主要临床症状为难治性低氧血症。据临床资料统计,肝肺综合征在肝硬化患者中发病率为4-29%。目前,HPS的发病机制研究已取得一定的成果,但仍然未完全阐明,且临床转化治疗还需进一步开展。其中,血管异常扩张、动静脉分流、氧合功能障碍是HPS的主要病理表现,这些变化通常引起肺血管重建,从而加速肺部病理的恶化进程。肺微血管异常扩张的病理机制是HPS中的研究热点,在我们团队的前期研究中发现,血管的异常扩张可能与肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）的异常增殖有关,而在另一方面,我们发现HPS病人在进行肝移植手术后,肺微血管阻力明显升高,表明肺微血管存在收缩反应,而在正常情况下,肺微血管是不具备这一特性的,血管的异常扩张无法完全用PMVECs的异常增殖来进行解释,因此可能存在其他的病理机制。在前期实验,采用HPS大鼠血清对PMVECs进行刺激培养,随后发现PMVECs中肌性相关蛋白SM-α-actin、calponi...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原来的胆总管结扎部位示意图，(B)改进后的胆总管结扎部位示意图，(C)原方法结扎5周后胆总管扩张程度，(D)改良方法结扎5周后胆总管扩张程度
图 2 (A)对照组 5 周后肝脏组织结构，(B)对照组 5 周后肺脏组织结构，(C)原方法结扎 5 周脏组织结构，(D) 原方法结扎 5 周后肺脏组织结构，(E)改良结扎 5 周后肝脏组织结构，(F)改良 5 周后肺脏组织结构。(G)原方法结扎和改良结扎 5 周后大鼠生存率，(H)原方法结扎和改良结扎后大鼠胆汁渗漏量。2.1.3.2 实验动物分组本次实验分为两组：即对照组(Control 组) 和实验组(HPS 组)2.1.3.3 动物模型的构建实验组中，手术前一天晚将大鼠禁食,实验当天取出称重后，剃除手术区域的毛发提前配置好 5%的水合氯醛，按照 9ml/kg 的剂量进行腹腔麻醉。待角膜反射，疼痛消失后，将大鼠安置固定于动物手术台上。消毒铺巾后，于大鼠剑突下两横指处沿线剪开一长约 2cm 的切口，逐层暴露进入腹腔；于大鼠右上腹区域轻轻牵拉出十肠，找到并暴露胆总管；用镊子游离出胆总管，取 2 号缝合线分别结扎近肝门端总管汇合上缘（高位结扎）和近十二指肠端处，随后用剪刀离断两结扎点之间的胆
图 3 胆总管结扎法构建 HPS 大鼠模型A.暴露腹腔 B 寻找十二指肠，游离胆总管 C 结扎胆总管上下端 D 关闭腹腔2.1.3.4 HPS 大鼠血清制备CBDL 手术 28 天之后，取出大鼠进行称重，将配制好的 5%水合氯醛按照 9ml/kg的剂量进行腹腔麻醉。待角膜反射，疼痛反射消失后，将大鼠固定于动物手术台上，剪去腹部毛发，用碘伏消毒腹部；沿腹部中线逐层剪开并完全暴露腹腔；小心暴露下腔静脉和腹主动脉，并分离其血管筋膜，之后用穿刺针刺入腹主动脉，抽取 8ml 左右的全血；将抽取的全血分为两管，一管供血气分析使用，另一管注入肝功管内，室温静置 2-4h，至有明显血清析出；根据血气指标结果，筛选典型的 HPS 血液样本，并进行离心（2000转/分, 20min）；在超净工作台内，收集上清液，再经细菌微孔进行过滤，并分装到 1.5mlEP管中，最后冻存于-80℃冰箱内。2.1.3.5 原代培养大鼠 PMVECs 的培养本次实验采用组织块法培养原代 PMVECs。取 1 只 SD 大鼠，使用 5%水合氯醛按
本文编号：3394344
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原来的胆总管结扎部位示意图，(B)改进后的胆总管结扎部位示意图，(C)原方法结扎5周后胆总管扩张程度，(D)改良方法结扎5周后胆总管扩张程度
图 2 (A)对照组 5 周后肝脏组织结构，(B)对照组 5 周后肺脏组织结构，(C)原方法结扎 5 周脏组织结构，(D) 原方法结扎 5 周后肺脏组织结构，(E)改良结扎 5 周后肝脏组织结构，(F)改良 5 周后肺脏组织结构。(G)原方法结扎和改良结扎 5 周后大鼠生存率，(H)原方法结扎和改良结扎后大鼠胆汁渗漏量。2.1.3.2 实验动物分组本次实验分为两组：即对照组(Control 组) 和实验组(HPS 组)2.1.3.3 动物模型的构建实验组中，手术前一天晚将大鼠禁食,实验当天取出称重后，剃除手术区域的毛发提前配置好 5%的水合氯醛，按照 9ml/kg 的剂量进行腹腔麻醉。待角膜反射，疼痛消失后，将大鼠安置固定于动物手术台上。消毒铺巾后，于大鼠剑突下两横指处沿线剪开一长约 2cm 的切口，逐层暴露进入腹腔；于大鼠右上腹区域轻轻牵拉出十肠，找到并暴露胆总管；用镊子游离出胆总管，取 2 号缝合线分别结扎近肝门端总管汇合上缘（高位结扎）和近十二指肠端处，随后用剪刀离断两结扎点之间的胆
图 3 胆总管结扎法构建 HPS 大鼠模型A.暴露腹腔 B 寻找十二指肠，游离胆总管 C 结扎胆总管上下端 D 关闭腹腔2.1.3.4 HPS 大鼠血清制备CBDL 手术 28 天之后，取出大鼠进行称重，将配制好的 5%水合氯醛按照 9ml/kg的剂量进行腹腔麻醉。待角膜反射，疼痛反射消失后，将大鼠固定于动物手术台上，剪去腹部毛发，用碘伏消毒腹部；沿腹部中线逐层剪开并完全暴露腹腔；小心暴露下腔静脉和腹主动脉，并分离其血管筋膜，之后用穿刺针刺入腹主动脉，抽取 8ml 左右的全血；将抽取的全血分为两管，一管供血气分析使用，另一管注入肝功管内，室温静置 2-4h，至有明显血清析出；根据血气指标结果，筛选典型的 HPS 血液样本，并进行离心（2000转/分, 20min）；在超净工作台内，收集上清液，再经细菌微孔进行过滤，并分装到 1.5mlEP管中，最后冻存于-80℃冰箱内。2.1.3.5 原代培养大鼠 PMVECs 的培养本次实验采用组织块法培养原代 PMVECs。取 1 只 SD 大鼠，使用 5%水合氯醛按
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