E3泛素连接酶TRIM21抗乙型肝炎病毒复制的作用及分子机制

发布时间：2021-09-12 18:12

　　[背景]乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染人体诱导急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎及肝硬化、肝纤维化和肝细胞癌,仍然是世界上最严重的公共健康问题之一。我国每年新发乙肝感染者仍有百万之巨,而现有乙肝治疗药物如核苷酸类似物、干扰素等,不能完全清除病毒,寻找新的乙肝病毒抑制剂或相关分子靶点显得十分迫切。三重基序蛋白（Tripartite motif protein,TRIM）家族成员TRIM21具有E3泛素连接酶活性,参与多种细胞生理功能,在病毒感染过程中发挥正向调控干扰素通路抗病毒和负向调控干扰素通路促进病毒复制的双重功能。有报道显示TRIM21通过其胞浆IgFc受体功能间接抑制HBV复制,但仍不清楚TRIM21是否具有直接抑制HBV复制的功能。[目的]探究TRIM21在肝细胞内HBV复制过程中发挥的作用及其分子机制。[方法]1.HBV感染肝细胞模型:以1μg pUC19-HBV1.3质粒转染肝癌细胞系Huh7和HepG2,48 h后逆转录定量PCR检测HBV复制中间体HBV RNA、ELISA检测上清包膜蛋白s抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）证实感染。2.建... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３．１?ＨＢＶ质粒转染Ｈｕｈ７细胞建立体外ＨＢＶ细胞模型??

第一部分?Ｅ３泛素连接酶ＴＲ１Ｍ２１抗乙型肝炎病毒复制的作用及分子机制??２４?ｈ和４８?ｈ均诱导ＴＲＩＭ２１在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平的显著上调表达（图３．２?Ａ－??Ｂ）?〇??Ａ?Ｂ??ＴＲＩＭ２１??｜?２＿〇ｉ?鬥＂？。?ＴＲＩＭ２１??〇）?丁?＊?ＣＺＤ?ｐＵＣ１９??＜???■?ｐＨＢＶ?２４ｈ?４８ｈ??｜?１＇５＂?■?＿?ｐＵＣ１９?ｐＨＢＶ?ｐＵＣ１９?ｐＨＢＶ??Ｉ?１，°＂?Ｉ?ＴＲＩＭ２１??ｏ?０．５－?■?■?：：＞二一、：?Ｉ、??＾?ＪＩＦ?ＭＰ－?ｈ——Ｎ??图３．２?ＨＢＶ感染肝癌细胞Ｈｕｈ７显著上调ＴＲＩＭ２１的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?ＨＢＶ?ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ?ＴＲＩＭ２１?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｈｅｐａｔｏｍａ?ｃｅｌｌ?Ｈｕｈ７．?Ｈｕｈ７?ｃｅｌｌ?ｗａｓ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｐＵＣ１９－ＨＢＶ１．３?ｏｒ?ｐＵＣ１９．?（Ａ）?２４?ｈ?ｏｒ?４８?ｈ?ｌａｔｅｒ，?ｔｈｅ?ｍＲＮＡ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ??ＴＲＩＭ２１?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｑＲＴ－ＰＣＲ．?（Ｂ）?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＴＲＩＭ２１?ｗａｓ?ｅｖａｌｕａｔｅｄ?ｂｙ??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ａｒｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?土?ＳＥＭ?ｏｆ?ｔｈｒｅｅ?ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．??（＊ｐ＜０．０５）．??综上，通过转染编码ＨＢＶ?ＤＮＡ全长基因的质粒进入肝细胞，可支持ＨＢＶ完成??整个复制、转录和表达过程，产生ＨＢＶＲＮＡ并诱导ＨＢｅＡｇ、ＨＢｓＡｇ的分泌。这

Ｅ３泛素连接酶ＴＲ１Ｍ２丨抗乙型肝炎病毒复制的作用及分子机制?第一部分??取转染２４?ｈ、４８?ｈ的细胞培养上清，ＥＬＩＳＡ检测上清中病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）和ｓ??抗原（ＨＢｓＡｇ）含量，结果显示过表达ＴＲＩＭ２１的肝细胞上清中ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ??水平显著下降，降幅接近６０％?（图３．３．１?Ｃ）。??Ａ?Ｂ??ＨＢＶ?ＲＮＡ??ＴＲＩＭ２１?－３?８０００°１?□?Ｖｅｃｔｏｒ??２４ｈ?４８ｈ?１?ｍ?ＴＲＩＭ２１????＜?６００００－?丁??Ｖｅｃｔｏｒ?ＴＲＩＭ２１?Ｖｅｃｔｏｒ?ＴＲＩＭ２１?ｉ?Ｈ＂??＾?４００００－??ｔｒｉｍ２ｉ?ｍｍｍ?ｍＫｍ?工????｜?２００００－?—１Ｌ?ＪＬ??ＡＣＴＩＮ?Ｊ?Ｈ??２４ｈ?４８ｈ??ｃ??ＨＢｅＡｇ?ＨＢｓＡｇ??３＿〇１?□?Ｖｅｃｔｏｒ?４．５＂｜?□?Ｖｅｃｔｏｒ??？?ｇ?２?５－?二１１?■?ＴＲＩＭ２１?？?ｇ?＾?ｍ?ＴＲＩＭ２１??ｐｌ?－２?Ｓ?——??？〇?２．０－?３．０－?ｆ＊ｌ??＜Ｓ＾１５．?＿?－??工？〇?ｕ?工?Ｔ３??〇＞?￡?■?ａ，?￡?钃??以１＿〇■?ｒ＾ｉ?■?以１＿５－?★?＿??ａ＞?ａｓ?ａ＞?ｎｓ?■?（ＭＭ??°－ｓ－?■?Ｉ?＾?ｎ＿?■??００Ｊ＿Ｊ＿ＬｔＨ??０．０－１—Ｉ￣４＊????２４ｈ?４８ｈ?２４ｈ?４８ｈ??图３．３．１?Ｈｕｈ７细胞中过表达ＴＲＩＭ２１可显著抑制ＨＢＶ基因的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?３．３．１?Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＴＲＩＭ２１?ｉｎ?Ｈｕｈ７?ｓｉ

【参考文献】：
期刊论文
[1]Seroepidemiology of hepatitis B virus infection and impact of vaccination[J]. Peng Huang,Li-Guo Zhu,Ye-Fei Zhu,Ming Yue,Jing Su,Feng-Cai Zhu,Hai-Tao Yang,Yun Zhang,Hong-Bing Shen,Rong-Bin Yu,Xiang-Jun Zhai,Zhi-Hang Peng.  World Journal of Gastroenterology. 2015(25)



本文编号：3394701