HLA-DRB1等位基因多态性与幽门螺杆菌感染及胃部疾病的相关性研究

发布时间：2017-05-02 07:13

  本文关键词：HLA-DRB1等位基因多态性与幽门螺杆菌感染及胃部疾病的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H. pylori）是一种定植于人的胃粘膜的微需氧、螺旋状的革兰阴性杆菌。H. pylori感染普遍存在，已造成全球50%以上的人口感染，尤其在中国等发展中国家，感染率远远高于发达国家。尽管H. pylori感染率很高，但只有大约10-20%感染者出现临床疾病状态。H. pylori长期持续性感染可导致慢性胃炎、胃溃疡及胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤等胃部疾病，且与胃癌的发生密切相关，已被世界卫生组织（WHO）列位1类致癌因子。 胃炎等胃肠道疾病的发生除了与H. pylori感染有关外，还受到宿主遗传、环境等因素的影响。宿主遗传因素与胃炎等胃肠疾病发生相关性主要体现在与免疫反应相关的免疫遗传因素，尤其是主要组织相容性复合体（MHC）系统。MHC系统编码的人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）是由一系列紧密连锁的基因座位所组成的具有高度多态性的复合体，是目前所知最具复杂的基因系统并且在免疫反应中起重要的作用。HLA具有单倍体遗传、连锁不平衡（LD）等遗传特征，，还具有抗原递呈和等位基因多态性的特点，因此HLA被认为与疾病的发生密切相关。 HLA主要包括Ⅰ和Ⅱ两类分子，分别介导CD8~+和CD4~+T淋巴细胞应答，发挥不同的免疫作用。其中Ⅱ类分子等位基因的多态性与H. pylori感染和胃部疾病发生存在一定相关性，已有文献报道。但由于不同的民族、不同的地区甚至研究者运用研究方法的不同，所得到的研究结果存在差异。目前，对于HLA进行的基因分型主要依据PCR反应为基础的分型方法，如PCR-RFLP、PCR-SSOP、PCR-SBT、PCR-SSP、PCR-SSCP。然而这些分型方法都存在着各自的局限性，费用却比较昂贵,其中PCR-SBT的分型方法被公认为是最直接，最准确的分型方法。 因此，本课题基于PCR-SBT方法的原理，运用自行设计的特异PCR引物首先建立了PCR-SBT基因分型方法，分析重庆地区汉族人群HLA-DRB1等位基因分布特点与多态性，探讨HLA-DRB1等位基因多态性与H. pylori感染以及感染后胃部疾病发生与类型的相关性。通过上述研究，为深入揭示H. pylori感染不同个体后多种类型疾病发生的免疫遗传学机制奠定了实验基础。 目的 本研究通过建立HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法，对中国重庆地区汉族人群进行HLA-DRB1等位基因分型，揭示HLA-DRB1基因多态性及其分布特点；阐明HLA-DRB1等位基因与H. pylori感染及胃部疾病发生的的相关性。 方法 1.外周静脉血基因组DNA的提取。运用血液基因组提取试剂盒提取血液基因组DNA，-20℃保存，用于后续PCR。 2. HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法的建立。根据IMGT/HLA数据库中HLA-DRB1第二外显子的基因序列，针对不同亚型第二外显子的碱基序列差异，采用Primer5.0软件设计出八条正向引物和一条反向引物，并由上海英骏生物技术有限公司合成(HPLC纯度)。将扩增的目的条带回收进行DNA测序。运用Chromas和Genetool软件分析和拼接测序结果，并在IMGT/HLA数据库进行比对，以确定其亚型。 3. H. pylori感染检测。采用ELISA方法检测血清中抗H. pylori特异性IgG抗体，以分析与判断H. pylori感染情况 4.数据分析。运用PCR-SBT的方法对所采集的样本进行HLA-DRB1等位基因分型，组间比较采用卡方（χ~2）检验，OR值和95%的置信区间用于患病风险的评价。 结果 1.重庆地区H. pylori感染率为34.2%。 2. HLA-DRB1*09:01(29.1%)等位基因频率最高，基因频率最低的是DRB1*12:01、DRB1*12:02、DRB1*14:05和DRB1*15:02，各占1.26%。 3. HLA-DRB1等位基因型频率在男女之间无显著性差异。 4. HLA-DRB1*04:05等位基因与H. pylori感染呈负关联（P=0.035、OR=0.265、95%CI=0.076-0.922）。 5. HLA-DRB1*15:01等位基因与胃癌或胃炎发生呈负关联（胃癌患者与正常比较，P=0.039、OR=0.287、95%CI=0.091-0.905；胃炎患者与正常比较，P=0.001、OR=0.061、95%CI=0.007-0.494）。 结论 1.成功建立并优化了HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法;重庆地区汉族人群HLA-DRB1等位基因呈现多态性，为免疫遗传因素和疾病的相关性研究提供了可靠的遗传学数据。 2. HLA-DRB1*04:05是宿主抵御H. pylori感染的抵抗基因。 3. HLA-DRB1*15:01是胃癌或胃炎的抵抗基因。
【关键词】：幽门螺杆菌 胃炎 胃癌 人类白细胞抗原 聚合酶链式反应-基于直接测序的分型方法 基因多态性
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R573
【目录】：

• 英文缩写一览表4-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 前言12-16
• 研究技术路线15-16
• 实验材料16-18
• 实验方法18-32
• 实验结果32-42
• 讨论42-46
• 全文总结46-47
• 本研究的创新、不足和展望47-48
• 致谢48-50
• 参考文献50-55
• 附图55-64
• 文献综述 HLA基因多态性与幽门螺杆菌感染及其致病的相关关系64-72
• 参考文献69-72
• 在读期间发表的论文72

【参考文献】

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本文编号：340516