NAFLD疾病中CYP3A表达下降由PXR非依赖性通路调控

发布时间：2021-11-17 09:19

　　第一部分NAFLD疾病状态下CYP3A表达与PXR核转位的变化实验目的:非酒精性脂肪性肝病对肝脏的多种药物代谢酶产生影响,其中CYP3A是主要的代谢酶,孕烷X受体（PXR）参与CYP3A转录水平的调节,本实验中我们阐述NAFLD疾病状态下两者表达水平的变化,为后续探讨两者可能存在的相互联系打下基础。材料和方法:动物实验我们选择C57BL/6小鼠,雄性,周龄为7-8周。分别给予正常饮食（SCD）、高脂饮食（HFD）喂养,8周后观察小鼠肝脏的脂肪变性,同时测定两者甘油三脂含量变化。细胞实验我们选择了人肝癌细胞株HepG2细胞,采用棕榈酸（PA）刺激24h诱导非酒精性脂肪性肝病体外模型,并测定甘油三酯含量。利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白质免疫印记（Western Blot）等手段检测HFD造模小鼠中CYP3A11的mRNA表达,以及PA造模HepG2细胞中CYP3A4的mRNA表达,同时检测两者PXR核转位水平的变化。结果:HFD造模小鼠肝脏中,检测到CYP3A11的mRNA与蛋白表达水平下降,PA造模HepG2细胞中,检测到CYP3A4的mRNA表达水平下降,NAFLD造模... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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引言
第一部分 NAFLD疾病状态下CYP3A表达与PXR核转位的变化
    1 材料与方法
        1.1 试剂
        1.2 仪器与耗材
        1.3 实验动物
    2 实验方法
        2.1 NAFLD小鼠造模方案
        2.2 HepG2细胞培养及NAFLD造模
        2.3 肝脏组织、细胞样本油红染色
        2.4 肝脏组织、细胞样本甘油三酯含量测定
        2.5 组织、细胞样本提取总RNA及逆转录
        2.6 qPCR
        2.7 组织、细胞样本提取总蛋白及蛋白定量
        2.8 组织、细胞样本提取核蛋白
        2.9 Western blot
        2.10 免疫荧光
        2.11 数据统计
    3 结果
        3.1 NAFLD小鼠模型的构建与评价
        3.2 NAFLD细胞模型的构建与评价
        3.3 CYP3A11表达在NAFLD动物模型中的变化
        3.4 CYP3A4表达在NAFLD细胞模型的变化及CYP3A4启动子被转录激活的变化
        3.5 PXR核转位在HFD造模小鼠及PA造模HepG2细胞中的变化
    4 讨论
    5 结论
第二部分 敲低及过表达PXR对NAFLD造模HepG2细胞中PXR-CYP3A4转录活性及表达的影响
    1 材料与方法
        1.1 试剂
        1.2 仪器和耗材
        1.3 质粒信息
        1.4 siRNA序列
    2 实验方法
        2.1 质粒扩增提取
        2.2 siRNA及质粒转染
        2.3 双荧光素酶报告基因检测
    3 结果
        3.1 敲低PXR对NAFLD造模HepG2细胞中PXR-CYP3A4转录活性及表达的影响
        3.2 过表达PXR对NAFLD造模HepG2细胞中PXR-CYP3A4转录活性及表达的影响
    4 讨论
    5 结论
不足与展望
参考文献
综述
    参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]2016年美国肝病年会非酒精性脂肪性肝病深度报道[J]. 赵泽华,范建高.  实用肝脏病杂志. 2017(01)
[2]What about non-alcoholic fatty liver disease as a new criterion to define metabolic syndrome?[J]. Giovanni Tarantino,Carmine Finelli.  World Journal of Gastroenterology. 2013(22)
[3]非酒精性脂肪肝危险因素流行病学论述[J]. 朱方超,黄智铭.  实用医学杂志. 2010(18)
[4]有机阴离子转运多肽1B1的遗传药理学进展[J]. 张伟,贺毅憬,周宏灏.  中国临床药理学与治疗学. 2008(07)



本文编号：3500616