针对P基因的siRNA对HBV表达影响的实验研究

发布时间：2021-11-29 13:26

　　目的:以乙型肝炎病毒（HBV）P基因为靶点,构建表达小干扰RNA（siRNA）的真核表达载体,体外观察针对P基因的siRNA在HepG2.2.15对HBV转录和翻译的影响。方法:将构建的五个psiRNA-H1真核表达质粒psiRNA0, psiRNA1, psiRNA2 psiRNA3,psiRNA4瞬时转染HepG2.2.15细胞,用半定量RT-PCR对HBV RNA（HBsAg-mRNA,HBeAg-mRNA和HBxAg-mRNA）进行检测,ELISA对细胞上清的HBsAg, HBeAg进行检测,用Western Blot检测X蛋白的表达。结果:酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了针对P基因不同位点的真核表达载体分别命名为psiRNA0, psiRNA1, psiRNA2 psiRNA3,psiRNA4。通过不同的检测方法,结果证明针对P基因的siRNA能下调HBVS基因,C基因和X基因表达,其中psiRNA1, psiRNA2对S基因的抑制明显强于psiRNA3,psiRNA4。psiRNA3,psiRNA4对C基因的抑制明显强于psiRNA1, psiRNA2,在所构建的psiR... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

3真核表达质粒用于siRNA试验的


本文编号：3526585