间歇性低氧对肝细胞脂质代谢的影响及可能机制

发布时间：2017-05-10 07:02

  本文关键词：间歇性低氧对肝细胞脂质代谢的影响及可能机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景与目的 非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一类除酒精和其他明确因素影响，以肝细胞内脂质过度沉积为主要特征的临床病理综合征[1-2]。近来有文献报道，睡眠呼吸暂停低通气综合征（sleepuapnea-hypopnea syndrome，SAHS）患者肝细胞内有异常的脂质沉积，认为慢性睡眠呼吸暂停综合征所致的间歇性低氧（intermenthypoxia，IH）可以诱发肝细胞脂质异常代谢[3]，目前有关间歇性低氧与肝细胞脂代谢之间的关系鲜见研究报道。活性氧（reactive oxygenspecies，ROS)、低氧诱导因子（hypoxia inducible factors,HIFs)是调控哺乳动物适应低氧环境的重要因子，脂肪分化相关蛋白（adiposedifferentiation-related protein，adipophilin ADFP）、固醇调节原件结合蛋白（sterol regulatory element binding protein, SREBP）-1c、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase, FAS）是调节肝细胞脂肪酸转运和合成的关键分子。本实验拟用三气培养箱、人正常肝细胞（L02）、肝癌细胞（HepG2）建立间歇性低氧细胞模型，探讨间歇性低氧对肝细胞脂代谢及相关分子的影响，旨在为治疗和预防NAFLD提供新的理论依据。方法 1、实验分组：对照组（21%O2）、实验组（间歇性低氧组） 2、建立间歇性低氧细胞模型：在三气培养箱中用不同氧浓度（1%02、2%02、3%02、21%02）培养人肝L02细胞和HepG2细胞持续8h/d，相继处理1、2、3、4、5、6d，，显微镜下观察细胞形态变化，MTT方法检测细胞活力，甘油三酯试剂盒测定细胞内甘油三酯含量；油红O染色观察肝细胞脂质沉积情况。 3、western-blot方法检测HIF-1α、HIF-2α、ADFP、SREBP-1c、FAS在肝细胞内的表达。 4、活性氧检测试剂盒检测ROS在L02、HepG2细胞内含量的变化。结果第一部分间歇性低氧诱导肝细胞脂质异常沉积 1、低氧浓度的筛选：MTT方法检测1%02、2%02、3%02、21%02对HepG2、L02细胞存活率的影响，结果示：经上述干预，1%02条件下，6d后细胞存活率小于50%，2%02、3%02条件下6d后的细胞存活率约100%，根据相关参考文献[19,15]，选择2%02、3%02进行后续筛选。 2、间歇性低氧时间点筛选：甘油三酯试剂盒检测2%02、3%02对肝细胞内TG的影响，结果示：2%02、3%02低氧处理组随时间延长，各时间点细胞内TG含量逐渐增加，至第5d达高峰；相同对应时间点2%02低氧组肝细胞内TG含量较3%02低氧组明显升高（L02：78.7±2.73vs56.2±1.73， t=13.92, p0.05; HepG2:96.4±3.67vs88.37±2.36,t=3.68, p0.05），差异有统计学意义，因此选用2%02为最佳低氧浓度，1、2、3、4、5d为低氧处理时间。 3、肝细胞内脂质检测 （1）随着时间的延长，对照组肝细胞TG含量无明显变化（FL02=0.6，P=0.670.05; FHepG2=0.82，P=0.530.05），经2%02间歇性低氧干扰后，随着处理时间的延长TG含量逐渐增多，差异均有统计学意义（FL02=61.83，P0.01；FHepG2=104.19，P0.01）。 （2）油红O染色：与对照组相比较，经间歇性低氧处理后L02和HepG2细胞胞质内橘红色脂滴随时间延长增多并出现融合现象。第二部分间歇性低氧对肝细胞脂质代谢影响的可能机制 1、肝细胞内HIF-1α、HIF-2α的蛋白表达变化 经2%02持续干扰8h/d，分别依次处理1、2、3、4、5d后，HIF-1α、HIF-2α在第1d表达量较对照组明显增多（P0.05），随着处理时间的延长HIF-1α的表达量逐渐增多（FL02=371.19, FHepG2=150.84,P0.05），HIF-2α的表达却逐渐下降，至低氧干预第4天低于对照组水平（tL02=3.18, tHepG2=2.54，P0.05）。 2、 L02和HepG2细胞中ROS的变化 实验组L02和HepG2细胞内的ROS含量较对照组增多（tL02=22.06,tHepG2=7.2, P0.05）并呈时间依赖性增多（FL02=1021.84，FHepG2=49.89，P0.01），差异有统计学意义。 3、肝细胞内SREBP-1c、FAS、ADFP分子的表达 与对照组比较，实验组第2d，SREBP-1c、FAS和ADFP蛋白表达开始升高（L02:tSREBP-1c=5.83, tFAS=9.84,tADFP=19.99, P0.05;HepG2:tSREBP-1c=8.4,tFAS=9.18, tADFP=5.46,P0.05），随着时间延长表达量逐渐增多，（FL02,SREBP-1c=204.49, FL02,FAS=38.2, FL02,ADFP=154.31, P0.05;FHepG2,SREBP-1c=107.35, FHepG2,FAS=279.71, FHepG2,ADFP.=352.06, P0.05），差异有统计学意义。结论 1、间歇性低氧可以诱导L02和HepG2细胞发生脂质异常沉积 2、间歇性低氧诱导产生的ROS可能通过调节低氧诱导因子和脂肪分化相关蛋白的表达，影响HIF-1α-SREBP-1c-FAS和ADFP途径导致肝细胞脂代谢异常，HIF-2α可能参与间歇性低氧诱导肝细胞脂变的早期事件。 3、活性氧和低氧诱导因子有可能成为研究非酒精性脂肪性肝病的新靶点。
【关键词】：间歇性低氧 活性氧 肝细胞脂变 低氧诱导因子
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-16
• 前言16-18
• 第一部分 间歇性低氧对肝细胞脂质代谢的影响18-29
• 前言18
• 1 材料和方法18-22
• 2 结果22-25
• 3 讨论25-26
• 4 小结26-27
• 参考文献27-29
• 第二部分 间歇低氧对肝细胞脂代谢影响的可能机制29-46
• 前言29-30
• 1 材料和方法30-36
• 2 结果36-41
• 3 讨论41-44
• 参考文献44-46
• 全文总结46-47
• 文献综述47-54
• 参考文献51-54
• 致谢54-55
• 攻读硕士学位期间完成的论文55-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 高爱滨;肖谦;;PPARα与非酒精性脂肪肝[J];国际消化病杂志;2007年01期

2 曹洁;沈薇;;非酒精性脂肪性肝病与慢性间歇性缺氧研究进展[J];实用肝脏病杂志;2012年04期

3 陈尉华;徐中南;陆伦根;曾民德;刘梅;茅益民;曹爱平;夏春光;房静远;;异甘草酸镁对培养肝细胞增殖影响的实验研究[J];肝脏;2006年01期

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本文编号：354216