ω-3长链多不饱和脂肪酸对肠道微生态的调节作用及其对小肠上皮细胞损伤的影响

发布时间：2017-05-10 21:12

  本文关键词：ω-3长链多不饱和脂肪酸对肠道微生态的调节作用及其对小肠上皮细胞损伤的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：ω-3长链多不饱和脂肪酸(co-3PUFAs)是重要的保健功能成分,其对多种疾病具有防治效果。近年来,肠道微生态变化在人体健康和疾病发生过程中的作用越来越受到关注,而ω-3PUFAs对肠道微生态的调节作用目前尚不清楚。本文以高含量ω-3PUFAs鱼油(60%)为材料,以灌胃方式给药ICR小鼠,以生理盐水作为对照,并收集处理组和对照组小鼠粪便,采用PCR-DGGE技术分析粪便样品中优势菌群的变化,以探讨ω-3PUFAs对肠道微生态的影响。结果表明,高含量ω-3PUFAs鱼油的摄入可显著改变ICR小鼠肠道微生态,具体表现在于高含量ω-3PUFAs可引起小鼠粪便中螺旋杆菌、梭菌、鞘脂单胞菌、假单胞菌及其他多种菌的数量减少。采用qPCR对处理组和对照组中幽门螺旋杆菌数量变化进行了定量测定,结果表明ω-3PUFAs处理后,ICR小鼠肠道幽门螺旋杆菌数量显著降低,与PCR-DGGE结果相吻合。本实验说明了ω-3PUFAs可以调节肠道菌群微生态,并能通过降低某些有害菌株数量,预防疾病发生。 现代环境问题与食品安全问题日益突出,人类健康受到严峻挑战,重金属中毒的事例频繁出现,小肠上皮细胞是人体内连接肠道内外环境的最主要媒介,同时也是抵御病原菌入侵肠道的第一道防线,研究ω-3PUFAs对重金属损伤的小肠上皮细胞的作用具有重要的现实意义,也有利于进一步揭示ω-3PUFAs对肠道健康的影响。本文以大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)为研究对象,探讨ω-3PUFAs对重金属损伤的IEC-6细胞的存活率的影响,并通过测定细胞中ROS、EGF和IL-6的含量变化,研究其影响机制。结果表明：ω-3PUFAs能缓解重金属中毒所带来的不良影响,提高小肠上皮细胞的存活率。该作用可能是通过抑制细胞中ROS、EGF及IL-6的表达来实现的。由此推断,其作用机制与氧化损伤和促炎因子分泌水平有关。
【关键词】：ω-3PUFAs 肠道菌群 PCR-DGGE IEC-6细胞 重金属损伤 炎性因子
【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R574
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 第一章 绪论13-24
• 1.1 微生态学13-14
• 1.2 肠道微生态及其研究现状14-20
• 1.2.1 肠道菌群14-15
• 1.2.2 肠道微生态平衡及影响因素15-16
• 1.2.3 肠道菌群与常见疾病16-18
• 1.2.3.1 肠道菌群与炎症性肠病16
• 1.2.3.2 肠道菌群与肥胖及相关代谢紊乱疾病16-17
• 1.2.3.3 肠道菌群与肾脏疾病17
• 1.2.3.4 肠道菌群与骨质疏松17-18
• 1.2.3.5 肠道菌群与焦虑、抑郁症18
• 1.2.4 微生态制剂的应用18-20
• 1.3 小肠上皮细胞及其研究进展20-22
• 1.3.1 小肠上皮细胞20
• 1.3.2 营养物质对小肠上皮细胞的调控20-21
• 1.3.2.1 氨基酸对小肠上皮细胞的调控20
• 1.3.2.2 维生素对小肠上皮细胞的调控20-21
• 1.3.2.3 生长因子对小肠上皮细胞的调控21
• 1.3.2.4 脂类对小肠上皮细胞的调控21
• 1.3.3 小肠菌群与小肠上皮细胞间关系的研究进展21-22
• 1.4 ω-3PUFAs与肠道健康的研究进展22-23
• 1.4.1 ω-3长链多不饱和脂肪酸22
• 1.4.2 ω-3PUFAs对肠道微生态的影响22
• 1.4.3 ω-3PUFAs对小肠上皮细胞的影响22-23
• 1.5 本课题选题及研究意义23-24
• 第二章 高ω-3PUFAs含量鱼油对小鼠肠道菌群的影响24-42
• 2.1 引言24-25
• 2.2 实验材料与仪器25
• 2.2.1 实验材料25
• 2.2.2 实验仪器25
• 2.3 实验方法25-32
• 2.3.1 鱼油脂肪酸成份检测25-26
• 2.3.2 小鼠处理及样品收集26
• 2.3.3 DNA提取26-28
• 2.3.4 PCR-DGGE28-29
• 2.3.4.1 引物设计28-29
• 2.3.4.2 PCR扩增29
• 2.3.4.3 DGGE29
• 2.3.4.4 DGGE条带回收29
• 2.3.5 回收条带DNA的纯化和克隆29-30
• 2.3.6 DGGE条带测序30-31
• 2.3.6.1 连接反应30
• 2.3.6.2 连接产物转化30
• 2.3.6.3 蓝白斑筛选30-31
• 2.3.6.4 质粒提取31
• 2.3.6.5 M13+/-测序31
• 2.3.7 进化分析31
• 2.3.8 荧光实时定量PCR31-32
• 2.4 实验结果32-40
• 2.4.1 鱼油中各脂肪酸含量的检测32-33
• 2.4.2 鱼油对小鼠健康的影响33
• 2.4.3 PCR-DGGE分析33-36
• 2.4.3.1 PCR扩增产物33-34
• 2.4.3.2 DGGE电泳图谱34-35
• 2.4.3.3 目标条带DNA的纯化35-36
• 2.4.4 测序结果36-37
• 2.4.5 进化分析37-38
• 2.4.6 鱼油组中肠道菌群的变化38-39
• 2.4.7 幽门螺旋杆菌qPCR定量结果39-40
• 2.5 讨论40-41
• 2.6 本章小结41-42
• 第三章 ω-3 PUFAs对金属离子损伤的IEC-6细胞生长的影响及其机理研究42-70
• 3.1 引言42
• 3.2 实验材料与试剂42
• 3.3 实验方法42-44
• 3.3.1 IEC-6细胞培养42-43
• 3.3.2 样品配制43
• 3.3.3 MTT分析43-44
• 3.3.3.1 金属离子及ω-3PUFAs浓度筛选43
• 3.3.3.2 ω-3PUFAs对金属离子损伤细胞存活率的影响43-44
• 3.3.4 ω-3PUFAs对金属离子损伤的IEC-6细胞的保护机制研究44
• 3.4 实验结果44-68
• 3.4.1 金属离子及ω-3PUFAs浓度筛选44-47
• 3.4.1.1 Cu~(2+)浓度筛选44
• 3.4.1.2 Cd~(3+)浓度筛选44-45
• 3.4.1.3 Pb~(2+)浓度筛选45
• 3.4.1.4 DHA安全浓度筛选45-46
• 3.4.1.5 EPA安全浓度筛选46-47
• 3.4.2 ω-3PUFAs对金属离子损伤细胞存活率的影响47-57
• 3.4.2.1 DHA对IEC-6细胞Cu~(2+)损伤的影响47-48
• 3.4.2.2 EPA对IEC-6细胞Cu~(2+)损伤的影响48-50
• 3.4.2.3 DHA对IEC-6细胞Cd~(3+)损伤的影响50-52
• 3.4.2.4 EPA对IEC-6细胞Cd~(3+)损伤的影响52-53
• 3.4.2.5 DHA对IEC-6细胞Pb~(2+)损伤的影响53-55
• 3.4.2.6 EPA对IEC-6细胞Pb~(2+)损伤的影响55-57
• 3.4.3 ω-3PUFAs对金属离子损伤的IEC-6细胞的保护机制研究57-68
• 3.4.3.1 DHA与Cu~(2+)作用时细胞ROS、EGF及IL-6表达水平的变化57-59
• 3.4.3.2 EPA与Cu~(2+)作用时细胞ROS、EGF及IL-6表达水平的变化59-61
• 3.4.3.3 DHA与Cd~(3+)作用时细胞ROS、EGF及IL-6表达水平的变化61-62
• 3.4.3.4 EPA与Cd~(3+)作用时细胞ROS、EGF及IL-6表达水平的变化62-64
• 3.4.3.5 DHA与Pb~(2+)作用时细胞ROS、EGF及IL-6表达水平的变化64-66
• 3.4.3.6 EPA与Pb~(2+)作用时细胞ROS、EGF及IL-6表达水平的变化66-68
• 3.5 讨论68
• 3.6 本章小结68-70
• 第四章 结论与展望70-72
• 参考文献72-79
• 致谢79-80
• 攻读学位期间参加的科研项目和成果80

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 黄志清;陈小玲;陈代文;余冰;何军;;长链n-3多不饱和脂肪酸对肠上皮细胞促炎细胞因子基因mRNA表达的影响[J];动物营养学报;2012年07期

2 梁榕旺;徐淑莉;韩庆广;郭熠洁;赵国琦;;肠上皮细胞营养调控研究进展[J];饲料工业;2009年07期

  本文关键词：ω-3长链多不饱和脂肪酸对肠道微生态的调节作用及其对小肠上皮细胞损伤的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：355486