黏液填充在消化道上皮微缺损及肠屏障功能作用的研究

发布时间：2017-05-10 22:10

  本文关键词：黏液填充在消化道上皮微缺损及肠屏障功能作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景及目的小肠上皮细胞由隐窝基底部的干细胞不断生成并在绒毛顶端脱落,这一过程形成肠上皮单层细胞间的微缺损(epithelial gaps)。然而,生理状态下,97%的gaps被非通透性的物质所填充,从而维持了肠上皮的屏障功能。但究竟被什么物质所填充,目前尚不清楚。肠道被覆黏液主要是由杯状细胞分泌的一种糖蛋白,其主要成分Muc2是含致密结构的大分子0-糖基化胶样黏蛋白,对黏膜上皮起保护和润滑作用,抵抗病原微生物及其他有害物质对黏膜的损伤。无菌的致密的内黏液层是阻止肠道细菌与上皮细胞接触的重要的物理屏障,研究发现,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者,随着内黏液层的破坏,细菌入侵到原本无菌的内黏液层。黏液的厚度及性质在UC的发病机制中起重要作用。共聚焦激光显微内镜(Confocal Laser Endomicroscopy, CLE)是先进的内镜检查技术,拥有组织学水平的分辨率和放大优势,可以清楚观察上皮细胞结构及亚细胞结构,并被誉为“光学活检”。既往研究通过CLE可以观察到人类回肠末端和直肠上皮中存在与单个上皮细胞大小相似的gaps结构。本研究旨在探讨黏液是否参与填充上皮微缺损,并进一步评价黏液填充上皮微缺损在局部肠屏障功能中的作用。方法自2014年6月至2014年12月,取就诊于山东大学齐鲁医院消化内科行共聚焦肠镜检查的UC患者及对照者的回肠末端组织,用卡诺氏液(Carnoy's solution)固定过夜,常规石蜡切片后行过碘酸雪夫AB-PAS染色,并行免疫组化方法和免疫荧光方法观察gaps及Muc2黏蛋白表达分布情况。另外,分析了自2013年1月至2014年12月至我院行CLE检查的UC患者和对照者的CLE回肠末端图片,选取图像清晰病例,共有39例UC患者及34例对照者共聚焦图像纳入本研究。运用改良Watson分级方法,Ⅱ级为功能性缺损,表现为单个细胞脱落伴荧光素渗出；Ⅲ级为结构性缺损,表现为大片细胞脱落,伴上皮荧光素渗漏。评价Watson Ⅱ/Ⅲ gaps缺损周长占所观察视野绒毛周长的百分比,用以评估回肠末端局部肠屏障功能。并分析两组之间杯状细胞占所观察视野绒毛上皮细胞数目的百分比,用以评估分泌黏液的杯状细胞在两组之间是否有变化。结果在荧光显微镜及光学显微镜下,均观察到黏液参与了填充上皮微缺损,且UC患者上皮微缺损未被黏液填充率增加,两组之间有统计学意义(27.52 (25,29.68) vs 12.27 (9.78 16.67), p0.001)。CLE下可清晰辨认杯状细胞和gaps结构,另外,分析CLE下回肠末端图像发现,UC患者存在明显的局部肠屏障功能障碍,两组之间有统计学意义(5.33(3.48,6.62)vs 0.27(0.00,0.69),p0.001)；且UC患者分泌黏液的杯状细胞数目占上皮细胞数目的比率明显降低,两组之间有统计学意义(17.38(16.00,19.87)vs 23.44(20.24,26.18),p0.001)。对上皮微缺损(%)与杯状细胞(%)进行Spearman秩相关分析,两组之间呈显著负相关(r=-0.74,p0.001)。结论1.明确了gaps存在时,黏液填充gaps是肠上皮屏障功能维持的直接生理机制。2.共聚焦内镜下,UC患者gaps缺损率较对照组明显增加,杯状细胞数目较对照组明显降低,两者呈显著负相关。3.本研究发现,UC患者gaps未被黏液填充率增加,且存在局部肠屏障功能缺损。
【关键词】：上皮微缺损 肠屏障功能 黏液 共聚焦激光显微内镜 杯状细胞
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符号说明11-12
• 前言12-16
• 资料与方法16-22
• 结果22-24
• 讨论24-28
• 结论28-29
• 附表及附图29-34
• 参考文献34-38
• 综述38-46
• 参考文献43-46
• 致谢46-47
• 攻读硕士期间发表的文章47-48
• 学位论文评阅及答辩情况表48

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本文编号：355588