CRISPR/Cas9敲除Ptgs2对肝星状细胞凋亡的影响

发布时间：2022-01-12 06:00

　　目的:研究敲除HSC-T6细胞Ptgs2基因后对其凋亡的影响,为临床上肝硬化防治探索新策略。方法:将大鼠HSC-T6细胞设置KD组(HSC-T6-Ptgs2^-/-细胞)、阴性对照NC组（HSC-T6-NC细胞）和空白对照CON组（HSC-T6细胞）。LV-Ptgs2-sgRNA慢病毒载体转染KD组,LV慢病毒载体转染NC组,CON组常规培养,不做干预。转染72小时后,电子荧光显微镜观察慢病毒转染效果并拍片,计算转染率。转染后72小时、96小时,采用Western blot分别检测三组HSC-T6细胞Ptgs2基因蛋白表达情况。转染5天后Annexin V-APC单染法染色,采用流式细胞技术分别检测三组细胞凋亡率。结果:（1）各组HSC-T6细胞慢病毒转染情况:KD组和NC组细胞均可见绿色荧光,CON组未见绿色荧光,经计算KD组和NC组转染效率在80%以上,慢病毒载体转染成功。（2）各组HSC-T6细胞Ptgs2蛋白的表达情况:KD组细胞LV-Ptgs2-sgRNA慢病毒感染72小时,Ptgs2蛋白表达明显低于NC组、CON组,差异具有统计学意义（P<0.05... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

2小时慢病毒转染HSC-T6细胞图片（×100倍）

2小时慢病毒转染HSC-T6细胞图片（×200倍）

转染72h及96h各组Ptgs2蛋白表达变化

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及脂质代谢的影响[D]. 阳学风.南华大学 2012

硕士论文
[1]阿魏酸联合脂肪间充质干细胞体外促肝星状细胞凋亡及机制的研究[D]. 许希燕.西南医科大学 2018
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[3]沉默COX-2对HSC-T6衰老的影响及机制探讨[D]. 唐艳芬.南华大学 2017
[4]沉默COX-2对HSC-T6增殖的影响及机制研究[D]. 周迁.南华大学 2017
[5]COX-2通过AA对HSC-T6细胞增殖及Acsl家族基因表达的调控[D]. 章烁.南华大学 2014



本文编号：3584237