体外恒磁场对Feridex-GFP双标记骨髓间充质干细胞在损伤肝脏中定植的影响
发布时间：2022-01-16 18:57
[背景及目的]进行性肝纤维化（liver fibrosis）是各种慢性肝病演变为肝硬化的主要发病机制,造成细胞外基质过度沉积,功能性肝细胞相对减少,尤其是肝损伤后功能性肝细胞减少,使得补充丢失的肝细胞已成为近年来研究的热点。干细胞移植是当今世界上最前沿、最热门的医疗新技术之一。国内外的研究及临床应用均表明,自体干细胞移植治疗肝硬化腹水等肝病疗效肯定,具有较好推广价值,被誉为“肝硬化治疗第二条终极途径”骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）是来源于中胚层具有多向分化能力的干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量最为丰富。BMSCs在一定的诱导条件下能分化为神经细胞、成骨细胞、造血细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、表皮细胞、腱细胞、脂肪细胞、肝细胞等。BMSCs具有极强的自我复制能力和多向分化潜能,且低免疫源性,具有在活体内外诱导分化为肝细胞的潜能,动物实验及临床初步研究显示移植自身BMSCs可改善肝功能,有望成为新的肝细胞源治疗肝脏疾病。BMSCs的导入途径是影响干细胞定植于肝脏的重要因素。门静脉或肝动脉介入肝脏或...
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
原代分离的(A)分离的原代细胞(X200倍);fC)第2代细胞(X200倍):
CD44表达为阳性，其中CD29的阳性率为98.05%, CD44的阳性率为96.92%(P<0.05)(见图3-2)。流式检测结果表明，纯化后的细胞符合骨髓间充质干细胞的特征，说明贴壁培养分离后的细胞为纯度较高的间充质干细胞，可进行后续诱导分化的实验。 8^ 0 ： 2 .答 §■； }\^ ■ I 爸? 一 I II Ml I ‘ Io ： 、 O ： ‘‘"；；义 ,丨 1 i i i..?i1。 10l 1t)2 103 104 > 101 io2 103 jo^CDIIbPE CD45PE8- 8. . 00 .ll :\ ^-A^I il f\ ^""7^"■“‘ 〉>一 :]丄■ ■,2^、:、一10。 10l 1o2 1o3 10^ loO 10l 1o2 10^ 1()4CD29 FITC CD44 FiTC图3-2流式细胞仪检测纯化后BMSCs的CDllb、CD45. CD29、CD44的表达情况。3.2不同途径移植BMSCs治疗急性肝损害的效果研究3.2.1大鼠BMSCs的体外双标记3.2.1.1 GFP重组逆转录病毒体外标记BMSCs将携带绿色突光蛋白的重组逆转录病毒感染体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞，用于急性肝损害大鼠模型移植后的示踪研究。在焚光显微镜下，可见细胞内有明亮绿色荧光，证实存在绿色荧光蛋白的表达，表明GFP标记BMSCs成功（见图3-3)。14
表3-1双标记的BMSCs的MTT检测（* P<0.05 )0D 值 Id 3d 7d 14d双标记 0.26±0.04 0.31士 0.11* 0.65±0.04 0.65±0.11未标记 0.28±0.06 0.4] 士0.12 0.64±0.11 0.68±0.133.2.2急性肝损伤大鼠模型的建立3.2.2.1病理结果实验组大鼠腹腔注射10%CCl4损伤液（5mL/kg)，建立急性肝损害模型。造模期间，观察大鼠的生长及生活情况，发现实验组大鼠被毛逐渐杂乱而无光泽，活动减少，精神萎靡，对外界刺激反应迟钝，食欲减退，体重下降，尿色深黄。但大鼠无拒饮拒食现象发生，整体耐受状态良好。而对照组大鼠体毛光滑、紧贴身体，肌肉丰满，反应敏捷，活动有力，眼睛有神，食欲旺盛，精神状态好。24小时后随机处死实验组及对照组大鼠各2只，切取肝右叶，常规进行HE
【参考文献】：
期刊论文
[1]PEI2k-SPIO纳米颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞的体外磁共振成像[J]. 陈荟竹,郭应坤,李真林,夏睿,张丽芝,侯江龙,郜发宝,艾华,宁刚. 四川大学学报(医学版). 2012(04)
[2]超顺磁性氧化铁标记对骨髓间充质干细胞多向分化诱导的影响[J]. 金旭红,杨柳,张寿,段小军,王富友,谭洪波. 生物医学工程学杂志. 2012(01)
[3]自体骨髓间充质干细胞移植治疗终末期肝病39例[J]. 何金秋,潘兴南,王崇国,杨文龙,熊墨龙,涂鸣汉,熊志群,杨玲玲. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(45)
[4]大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件的优化及生物学特性[J]. 赵玉金,李瑶琛,赖洁娟,王海燕,黄苏娜,蒋建新. 第三军医大学学报. 2010(20)
[5]SPIO标记下大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能及体外MR成像[J]. 许杰华,李丹,于春鹏,周斌,颜荣华,王劲,朱康顺,单鸿. 中山大学学报(医学科学版). 2009(02)
[6]活体荧光成像技术在肿瘤研究中的应用[J]. 张士新,陈明心,李芳秋. 医学研究生学报. 2009(02)
[7]恒磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响[J]. 徐巧玲,罗二平,路丽华,李雪琦,罗鹏,申广浩. 中国医学物理学杂志. 2009(01)
[8]经肝动脉外周血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化11例[J]. 陈薇,曾达武,陈靖. 福建医药杂志. 2008(06)
[9]干细胞在肝病治疗中的应用[J]. 李金辉,汪铮,李海. 胃肠病学. 2008(12)
[10]大鼠骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记及MR成像[J]. 周斌,于春鹏,李丹,姜在波,钱结胜,朱康顺,庞鹏飞,单鸿. 中国医学影像技术. 2008(12)
本文编号：3593240
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
原代分离的(A)分离的原代细胞(X200倍);fC)第2代细胞(X200倍):
CD44表达为阳性，其中CD29的阳性率为98.05%, CD44的阳性率为96.92%(P<0.05)(见图3-2)。流式检测结果表明，纯化后的细胞符合骨髓间充质干细胞的特征，说明贴壁培养分离后的细胞为纯度较高的间充质干细胞，可进行后续诱导分化的实验。 8^ 0 ： 2 .答 §■； }\^ ■ I 爸? 一 I II Ml I ‘ Io ： 、 O ： ‘‘"；；义 ,丨 1 i i i..?i1。 10l 1t)2 103 104 > 101 io2 103 jo^CDIIbPE CD45PE8- 8. . 00 .ll :\ ^-A^I il f\ ^""7^"■“‘ 〉>一 :]丄■ ■,2^、:、一10。 10l 1o2 1o3 10^ loO 10l 1o2 10^ 1()4CD29 FITC CD44 FiTC图3-2流式细胞仪检测纯化后BMSCs的CDllb、CD45. CD29、CD44的表达情况。3.2不同途径移植BMSCs治疗急性肝损害的效果研究3.2.1大鼠BMSCs的体外双标记3.2.1.1 GFP重组逆转录病毒体外标记BMSCs将携带绿色突光蛋白的重组逆转录病毒感染体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞，用于急性肝损害大鼠模型移植后的示踪研究。在焚光显微镜下，可见细胞内有明亮绿色荧光，证实存在绿色荧光蛋白的表达，表明GFP标记BMSCs成功（见图3-3)。14
表3-1双标记的BMSCs的MTT检测（* P<0.05 )0D 值 Id 3d 7d 14d双标记 0.26±0.04 0.31士 0.11* 0.65±0.04 0.65±0.11未标记 0.28±0.06 0.4] 士0.12 0.64±0.11 0.68±0.133.2.2急性肝损伤大鼠模型的建立3.2.2.1病理结果实验组大鼠腹腔注射10%CCl4损伤液（5mL/kg)，建立急性肝损害模型。造模期间，观察大鼠的生长及生活情况，发现实验组大鼠被毛逐渐杂乱而无光泽，活动减少，精神萎靡，对外界刺激反应迟钝，食欲减退，体重下降，尿色深黄。但大鼠无拒饮拒食现象发生，整体耐受状态良好。而对照组大鼠体毛光滑、紧贴身体，肌肉丰满，反应敏捷，活动有力，眼睛有神，食欲旺盛，精神状态好。24小时后随机处死实验组及对照组大鼠各2只，切取肝右叶，常规进行HE
【参考文献】：
期刊论文
[1]PEI2k-SPIO纳米颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞的体外磁共振成像[J]. 陈荟竹,郭应坤,李真林,夏睿,张丽芝,侯江龙,郜发宝,艾华,宁刚. 四川大学学报(医学版). 2012(04)
[2]超顺磁性氧化铁标记对骨髓间充质干细胞多向分化诱导的影响[J]. 金旭红,杨柳,张寿,段小军,王富友,谭洪波. 生物医学工程学杂志. 2012(01)
[3]自体骨髓间充质干细胞移植治疗终末期肝病39例[J]. 何金秋,潘兴南,王崇国,杨文龙,熊墨龙,涂鸣汉,熊志群,杨玲玲. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(45)
[4]大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件的优化及生物学特性[J]. 赵玉金,李瑶琛,赖洁娟,王海燕,黄苏娜,蒋建新. 第三军医大学学报. 2010(20)
[5]SPIO标记下大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能及体外MR成像[J]. 许杰华,李丹,于春鹏,周斌,颜荣华,王劲,朱康顺,单鸿. 中山大学学报(医学科学版). 2009(02)
[6]活体荧光成像技术在肿瘤研究中的应用[J]. 张士新,陈明心,李芳秋. 医学研究生学报. 2009(02)
[7]恒磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响[J]. 徐巧玲,罗二平,路丽华,李雪琦,罗鹏,申广浩. 中国医学物理学杂志. 2009(01)
[8]经肝动脉外周血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化11例[J]. 陈薇,曾达武,陈靖. 福建医药杂志. 2008(06)
[9]干细胞在肝病治疗中的应用[J]. 李金辉,汪铮,李海. 胃肠病学. 2008(12)
[10]大鼠骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记及MR成像[J]. 周斌,于春鹏,李丹,姜在波,钱结胜,朱康顺,庞鹏飞,单鸿. 中国医学影像技术. 2008(12)
本文编号：3593240
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