褪黑素对实验性肝纤维化大鼠氧化应激及TGF-β1/Smad信号通路的影响

发布时间：2022-01-22 14:00

　　背景肝纤维化是慢性肝脏疾病必经的病理过程,其涉及细胞及分子事件众多。近年来研究证明肝纤维化为一动态过程,经合理治疗后可以逆转。目前研究已经证明氧化应激及肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSCs）的活化在肝纤维化形成发展过程中发挥着重要的作用。褪黑素（N-乙酰-5-甲氧色氨酸,melatonin）为脑内松果腺体分泌的具有强大抗氧化能力的一种激素。研究证明褪黑素能改善多种急性及慢性肝脏损伤。前期研究结果显示褪黑素对肝纤维化具有一定的改善作用,且抗纤维化作用与其抗氧化作用相关。HSCs的活化在肝纤维化过程中发挥着关键性的作用,其中转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）是刺激HSCs活化的最重要的细胞因子。而TGF-β1主要通过细胞内Smad蛋白发挥其促进肝纤维化的作用。研究证明抑制TGF-β1/Smad信号通路可改善肝纤维化。褪黑素抗纤维化的机制目前仍未完全清楚,本文旨在四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的肝纤维化模型基础上进一步证明褪黑素对肝纤维化的保护作用,并探讨褪黑素抗纤维化作用... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
1.前言
2.材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验药物及试剂
        2.1.3 部分实验试剂配制
        2.1.4 实验仪器及设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验性CCl_4肝纤维化大鼠模型的建立
        2.2.2 大鼠血清肝功能检测
        2.2.3 大鼠肝脏病理检查
            2.2.3.1 肝脏组织固定、包埋切片、脱蜡至水
            2.2.3.2 HE染色
            2.2.3.3 VG染色
            2.2.3.4 肝组织病理染色结果分析
        2.2.4 肝组织Hyp含量的测定
        2.2.5 肝组织MDA含量、GPx酶活力测定
            2.2.5.1 肝脏匀浆的制备
            2.2.5.2 蛋白浓度的测定（考马斯亮兰法）
            2.2.5.3 MDA含量测定（TBA法）
            2.2.5.4 GPx酶活力测定
        2.2.6 免疫组化测定肝TGF-β1/Smad通路表达
            2.2.6.1 TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3 免疫组化染色方法
            2.2.6.2 免疫组化结果评估
        2.2.7 Western Blotting测定肝TGF-β1/Smad通路表达
            2.2.7.1 提取肝组织总蛋白
            2.2.7.2 BCA法测定蛋白浓度
            2.2.7.3 定蛋白浓度、变性
            2.2.7.4 SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白
            2.2.7.5 检测目的蛋白（ECL发光法）
        2.2.8 统计学分析
3.结果
    3.1 大鼠血清肝功能指标测定结果
    3.2 大鼠肝脏病理检查结果
    3.3 大鼠肝组织Hyp的含量测定结果
    3.4 大鼠肝组织匀浆MDA含量及GPx活性测定结果
    3.5 免疫组化法测定肝组织TGF-β1/Smad通路表达结果
    3.6 Western Blotting测定肝组织TGF-β1/Smad通路表达结果
4. 讨论
    4.1 CCl_4肝纤维化大鼠模型的建立
    4.2 氧化应激与肝纤维化的关系
    4.3 褪黑素抗纤维化与氧化应激的关系
    4.4 TGF-β1/Smad通路与肝纤维化的关系
    4.5 氧化应激与TGF-β1/Smad信号通路的关系
    4.6 褪黑素抗纤维化与TGF-β1/Smad通路的关系
5.结论
参考文献
附录 个人简历
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]TGF-β1、PDGF、CTGF与肝纤维化发病机制的相关性研究进展[J]. 田甜,马国珍,廖志峰,卢雨蓓.  甘肃医药. 2014(10)
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[4]shRNA重组慢病毒沉默SMAD3对大鼠肝纤维化的抑制作用[J]. 张莹,孔贺利,张建军,刘梅,任锋,刘霜,陈煜,段钟平,郑素军.  实用肝脏病杂志. 2014(03)
[5]TGFβ1-Smad3-ILK信号转导通路与大鼠肝纤维化的相关性研究[J]. 吴雄健,毛忠懿.  中国当代医药. 2013(36)
[6]肝纤维化中的TGF-β1/Smad信号通路[J]. 汤雯,姜春燕.  中华临床医师杂志(电子版). 2013(07)
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[8]大鼠肝纤维化模型建立及肝纤维化的检测[J]. 黄迪,古维立,胡志文,张帅,王成兴.  广州医药. 2012(05)
[9]褪黑素对大鼠肝纤维化的影响及部分机制研究[J]. 洪汝涛,许建明,沈继龙,梅俏,胡元生,罗庆礼.  中国药理学通报. 2012(08)
[10]氧化应激在肝纤维化发展过程中的作用[J]. 李丰衣,张琳,聂为民.  中华中医药学刊. 2012(04)



本文编号：3602324