高脂饮食及小檗碱对非酒精性脂肪肝病幼鼠生长及胰岛素样生长因子表达的影响

发布时间：2017-05-14 13:24

  本文关键词：高脂饮食及小檗碱对非酒精性脂肪肝病幼鼠生长及胰岛素样生长因子表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 1、研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)基因在非酒精性脂肪肝病细胞模型中的表达。 2、观察小檗碱对非酒精性脂肪肝病细胞模型脂质沉积和IGF-1、IGFBP-3表达的干预作用。 3、研究高脂饮食及小檗碱对幼鼠生长及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的影响,阐明血清和肝脏组织1GF-1代谢紊乱与非酒精性脂肪肝病(NAFLD)幼鼠生长迟缓的关系。 方法 1、用油酸诱导永生化人肝细胞(immortalized human hepatocyte,IHH)建立非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)细胞模型,油红O染色和细胞内甘油三酯含量检测观察细胞脂肪变情况。IHH细胞分为正常组,NAFLD组,其中正常组细胞以DMEM/F12培养基培养,NAFLD组给予油酸0.5mmol/L处理72h,采用RT-PCR与Western-blotting和免疫荧光染色方法检测IGF-1和IGFBP-3的表达变化。 2、将IHH细胞分为正常组,NAFLD组,小檗碱组,应用RT-PCR、Western-blotting和免疫荧光染色法,检测小檗碱干预后,肝细胞脂质沉积及IGF-1、IGFBP-3mRNA和蛋白表达的变化。 3、21日龄SD雄性大鼠60只,随机分成正常组(N)、脂肪肝组(NAFLD)、小檗碱组(Ber),无特定病原环境下饲养5周,测量幼鼠体重、鼻-尾长度。行肝脏组织HE染色、血清生化指标及肝脏组织甘油三酯(TG)含量检测。确定高脂饮食诱导NAFLD幼鼠造模成功后,测定血清IGF-1及IGFBP-3的水平,采用RT-PCR与Western-blotting检测肝脏IGF-1和IGFBP-3的mRNA和蛋白表达。 结果 0.5mmol/L由酸成功诱导IHH细胞脂肪变性,油红O染色显示细胞内脂肪滴明显增多,细胞内甘油三酯含量从正常组的(150.2±15.58)(ug/mg protein)增加到(275.7±27.19)(ug/mg Protein)(P0.01).油酸诱导后,IHH细胞IGF-1、IGFBP-3mRNA及蛋白表达水平较正常组显著下降(P0.01)。 经10umol/L小檗碱干预后,油红O染色显示细胞内脂肪滴减少,细胞内甘油三酯含量从NAFLD组的(275.7±27.19)(ug/mg protein)下降到(236.1±21.68)(ug/mg protein)(P0.05)。小檗碱组IHH细胞IGF-1mRNA、IGFBP-3mRNA及蛋白表达水平较NAFLD组升高,基本恢复至正常组水平(P0.01)。 5周高脂饲料喂养后,HE染色结果显示脂肪肝组幼鼠肝脏符合典型的NAFLD病理特征；与正常组相比,NAFLD组血清总胆固醇TC、血清高敏C反应蛋白、ALT、肝脏组织TG含量均显著升高(P0.01)。小檗碱干预后血清TC、ALT显著下降(P0.01)。NAFLD组幼鼠体重、鼻-尾长度较正常组增长缓慢,差异有统计学意义(P0.01)。小檗碱组幼鼠体重、鼻-尾长度低于NAFLD组,差异无统计学意义(P0.01)。NAFLD组胫骨长度和股骨长比正常组有下降趋势,但差异无统计学意义(P0.05)；NAFLD组股骨的骨密度和骨矿含量均低于正常组(P0.01)。小檗碱组幼鼠胫骨和股骨长度与NAFLD组比较无统计学意义(P0.05),骨密度和骨矿含量较NAFLD组升高,有统计学意义(P0.01)。NAFLD组幼鼠血清IGF-1和IGFBP-3较正常组表达显著下降(P0.01)；血清GH低于正常组,差异无统计学意义(P0.05)；小檗碱干预后幼血清IGF-1与IGFBP-3表达较NAFLD组表达升高(P0.01)。 结论 1、证实非酒精性脂肪肝病细胞模型IGF-1和IGFBP-3的表达下降,为深入研究临床上部分非酒精性脂肪肝病儿童身高受限的机制提供实验基础。 2、小檗碱具有提高非酒精性脂肪肝病细胞模型IGF-1、IGFBP-3表达的作用。 3、血清1GF-1浓度与大鼠鼻-尾长度、体重呈正相关,高脂饮食幼鼠生长迟缓,可能与肝脏组织和血清1GF-1浓度减低有关。小檗碱干预后,对幼鼠体重、体长无明显的促进作用,但具有提高幼鼠血清IGF-1和IGFBP-3的表达和改善幼鼠骨密度、骨矿物质含量的作用。
【关键词】：非酒精性脂肪肝病 幼鼠 生长 胰岛素样生长因子 小檗碱
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文~.略词对照10-12
• 第一部分 文献综述12-24
• 综述一 胰岛素样生长因子系统对生长迟缓影响的机制研究进展12-16
• 1 胰岛素样生长因子系统的组成及功能12-13
• 2 IGFs的分泌异常与疾病的相关性13-14
• 3 现状与展望14
• 参考文献14-16
• 综述二 中西医对胰岛素样生长因子调控认识的研究进展16-24
• 1 胰岛素样生长因子对多系统疾病的影响16-18
• 2 中医药对胰岛素样生长因子的调控18-21
• 3 现状与展望21
• 参考文献21-24
• 实验研究24-52
• 实验一 非酒精性脂肪变性肝细胞模型的建立24-31
• 前言24
• 材料与方法24-27
• 结果27-30
• 讨论30
• 参考文献30-31
• 实验二 小檗碱对非酒精性脂肪变性肝细胞模型IGF-1、IGFBP-3的影响31-39
• 前言31
• 材料与方法31-34
• 结果34-37
• 讨论37-38
• 参考文献38-39
• 实验三 高脂饮食及小檗碱对幼鼠生长及胰岛素样生长因子表达的影响39-52
• 前言39-40
• 材料与方法40-43
• 结果43-46
• 讨论46-49
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 个人简历53

【参考文献】

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本文编号：365317