CRP介导的肠道菌群免疫逃逸对急性结肠炎的促进作用初探
发布时间：2023-02-19 14:21
炎性肠病(Inflammatory Bowel Diseases,IBD)是以肠道炎症和组织损伤为特征的炎症,我国已有150万病患。目前来说,IBD的发病机制不甚明了,有研究表明肠道上皮破损,肠道菌群入侵,还有巨噬细胞有关的免疫反应,都与此相关。实验室之前的研究表明结肠癌中肠道上皮细胞中C-反应蛋白(C-Reactive Protein,CRP)启动子的-286位点出现高频突变,因此我们怀疑CRP与肠道病变密切相关,但具体的影响与作用机制目前尚不明确。于是我们构建了肠道上皮高表达人CRP(IEC-huCRPtg)小鼠与CRP-KO小鼠,并使用葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导急性结肠炎。在动物实验中我们发现肠道CRP对疾病起促进作用;随后,我们发现CRP与细菌存在结合,且结合后的CRP不会随粪便排出;最后,我们确认了CRP是通过结合并影响肠道菌群,诱使部分细菌进入肠道黏液层,从而干扰黏液层原有细菌的正常稳态,影响了黏液层的保护功能,使DSS诱导的急性IBD恶化。
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 炎症性肠病
1.1.1 IBD的发病机制
1.1.2 来自肠道微生物群的抗原是IBD发生的起始
1.1.3 肠粘膜功能的受损是IBD发生的前奏
1.1.4 损伤情况下,肠黏膜中固有免疫应答与获得性免疫应答共同恶化黏膜损伤
1.2 肠道的结构功能
1.2.1 肠壁与肠上皮的结构
1.2.2 肠上皮的重要作用
1.3 肠道菌群与肠粘膜免疫屏障的关系
1.3.1 人体对肠道菌群的调控功能
1.3.2 肠道菌群对人体的调控功能
1.4 CRP的研究现状
1.4.1 CRP的结构
1.4.2 CRP对肠道菌群的调控潜力
1.4.3 CRP与炎症
第2章 材料与方法
2.1 研究对象
2.2 实验试剂配制
2.2.1 DNA提取试剂
2.2.2 蛋白质提取试剂
2.2.3 酶联免疫吸附(ELISA)所用试剂
2.2.4 蛋白质免疫印迹(Western Blot)所用试剂
2.2.5 IHC所用试剂
2.2.6 流式细胞所用试剂
2.2.7 引物表
2.3 实验方法
2.3.1 使用2%DSS在 IEC-huCRPtg鼠中诱导急性结肠炎
2.3.2 小鼠鉴定
2.3.3 使用Q-PCR在转录水平检测基因表达
2.3.4 翻译水平检测蛋白质表达
2.3.5 组织化学检测
2.3.6 肠道菌群的流式细胞术
2.3.7 粪菌移植(FMT)与造模
第3章 结果与分析
3.1 IEC-huCRPtg小鼠的繁育
3.1.1 通过 Q-PCR 检测,选取大肠 CRP 表达量最高的小鼠
3.1.2 转基因鼠基因型鉴定
3.1.3 IEC-huCRPtg 鼠的肠道中 CRP 表达量显著增加
3.2 CRP-KO鼠的繁育
3.3 IEC-huCRPtg+鼠急性 IBD 病情加重
3.3.1 IEC-huCRPtg+鼠体重减轻程度加重
3.3.2 IEC-huCRPtg+鼠结肠缩短加重
3.3.3 IEC-huCRPtg+鼠炎症因子表达上升幅度增加
3.3.4 IEC-huCRPtg 鼠肠道破损更严重
3.3.5 IEC-huCRPtg 鼠黏液层变薄更显著
3.4 CRP-KO鼠急性IBD病情减轻
3.4.1 CRP-KO 鼠体重降低减轻
3.4.2 CRP-KO 鼠大肠缩短减轻
3.4.3 CRP-KO 鼠炎症因子表达增加幅度减少
3.4.4 CRP-KO 鼠结肠破损程度减轻
3.5 IEC-huCRPtg鼠肠道环境检测
3.5.1 粪便中未检出huCRP
3.5.2 肠内容物中存在 huCRP
3.5.3 huCRP 表达于肠隐窝
3.6 实验鼠肠道菌群检测
3.6.1 粪便菌群测序
3.6.2 肠道菌群在小肠处与 CRP 存在结合
3.7 CRP与sIg A存在互作
3.8 肠道菌群与急性IBD关系的构建
3.8.1FMT实验
第4章 结论与讨论
参考文献
在学期间的研究成果
致谢
本文编号：3746384
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 炎症性肠病
1.1.1 IBD的发病机制
1.1.2 来自肠道微生物群的抗原是IBD发生的起始
1.1.3 肠粘膜功能的受损是IBD发生的前奏
1.1.4 损伤情况下,肠黏膜中固有免疫应答与获得性免疫应答共同恶化黏膜损伤
1.2 肠道的结构功能
1.2.1 肠壁与肠上皮的结构
1.2.2 肠上皮的重要作用
1.3 肠道菌群与肠粘膜免疫屏障的关系
1.3.1 人体对肠道菌群的调控功能
1.3.2 肠道菌群对人体的调控功能
1.4 CRP的研究现状
1.4.1 CRP的结构
1.4.2 CRP对肠道菌群的调控潜力
1.4.3 CRP与炎症
第2章 材料与方法
2.1 研究对象
2.2 实验试剂配制
2.2.1 DNA提取试剂
2.2.2 蛋白质提取试剂
2.2.3 酶联免疫吸附(ELISA)所用试剂
2.2.4 蛋白质免疫印迹(Western Blot)所用试剂
2.2.5 IHC所用试剂
2.2.6 流式细胞所用试剂
2.2.7 引物表
2.3 实验方法
2.3.1 使用2%DSS在 IEC-huCRPtg鼠中诱导急性结肠炎
2.3.2 小鼠鉴定
2.3.3 使用Q-PCR在转录水平检测基因表达
2.3.4 翻译水平检测蛋白质表达
2.3.5 组织化学检测
2.3.6 肠道菌群的流式细胞术
2.3.7 粪菌移植(FMT)与造模
第3章 结果与分析
3.1 IEC-huCRPtg小鼠的繁育
3.1.1 通过 Q-PCR 检测,选取大肠 CRP 表达量最高的小鼠
3.1.2 转基因鼠基因型鉴定
3.1.3 IEC-huCRPtg 鼠的肠道中 CRP 表达量显著增加
3.2 CRP-KO鼠的繁育
3.3 IEC-huCRPtg+鼠急性 IBD 病情加重
3.3.1 IEC-huCRPtg+鼠体重减轻程度加重
3.3.2 IEC-huCRPtg+鼠结肠缩短加重
3.3.3 IEC-huCRPtg+鼠炎症因子表达上升幅度增加
3.3.4 IEC-huCRPtg 鼠肠道破损更严重
3.3.5 IEC-huCRPtg 鼠黏液层变薄更显著
3.4 CRP-KO鼠急性IBD病情减轻
3.4.1 CRP-KO 鼠体重降低减轻
3.4.2 CRP-KO 鼠大肠缩短减轻
3.4.3 CRP-KO 鼠炎症因子表达增加幅度减少
3.4.4 CRP-KO 鼠结肠破损程度减轻
3.5 IEC-huCRPtg鼠肠道环境检测
3.5.1 粪便中未检出huCRP
3.5.2 肠内容物中存在 huCRP
3.5.3 huCRP 表达于肠隐窝
3.6 实验鼠肠道菌群检测
3.6.1 粪便菌群测序
3.6.2 肠道菌群在小肠处与 CRP 存在结合
3.7 CRP与sIg A存在互作
3.8 肠道菌群与急性IBD关系的构建
3.8.1FMT实验
第4章 结论与讨论
参考文献
在学期间的研究成果
致谢
本文编号：3746384
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3746384.html
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