乙肝丙肝PBMC中ZIP2和ZIP8的表达及HBV对THP-1中ZIP2和ZIP8表达的影响

发布时间：2017-05-20 14:12

  本文关键词：乙肝丙肝PBMC中ZIP2和ZIP8的表达及HBV对THP-1中ZIP2和ZIP8表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景：锌是生物体所必须的微量元素之一,是机体多种酶的必需组分或激活因子,与机体发育、骨骼生长、免疫功能、内分泌调节、蛋白质和核酸代谢等一系列生理活动密切相关。锌缺乏可以造成多系统的损害,锌离子代谢的稳态平衡对维持机体正常生理功能至关重要。随着分子生物学技术的不断发展,近年来已发现哺乳动物中存在两个重要锌转运蛋白家族直接参与细胞内锌离子的稳态代谢,即SLC39A (solute-linked carrier 39A, SLC39A)和SLC30A (solute-linked carrier 30A, SLC30A)两大家族。SLC39A基因家族也被命名为ZIP (ZRT, IRT-like protein, ZIP)家族。而SLC30A基因家族又被称ZnT (zinc transporter 1,ZnT)家族。SLC39A和SLC30A两个转运蛋白家族分别参与了锌离子转进和转出细胞的运输过程。两大家族锌转运蛋白在各种亚细胞器、细胞及器官中的分布不同,具有一定的组织特异性。越来越多的证据表明SLC39A 和 SLC30A两大家族不仅直接参与了细胞的锌离子稳态代谢,同时还通过复杂的机制参与肿瘤和糖尿病等疾病的发生和发展,它们逐渐成为锌营养和代谢疾病的研究热点。人类ZIP2是首先被报道的哺乳动物SLC39A家族成员。hZIP2组织表达较低且局限,仅在前列腺、子宫、子宫颈上皮、视神经及单核细胞中表达。而用锌螯合剂TPEN处理人THP-1单核细胞系或人外周血单核细胞造成缺锌细胞模型,发现其hZIP2 mRNA表达明显增加,提示人hZIP2转录表达受锌离子调控。ZIP8与炎症免疫关系密切。ZIP8表达下降可降低胞内锌含量,损害线粒体功能,从而引起细胞大量死亡。另外,ZIP8在人类T细胞中表达较高,当有外界刺激时,T细胞中ZIP8表达明显升高,该蛋白可通过调控锌在溶酶体内的转运从而调控T细胞γ-干扰素的表达。乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化以及其慢性持续感染的确切机制尚未完全明了,大多学者认为宿主免疫系统与病毒相互作用这一因素是乙型肝炎病毒感染慢性化的重要原因。在HBV持续感染患者中,不能产生有效的针对HBV的特异性细胞毒T淋巴细胞反应,从而不能有效的彻底清除HBV,是HBV感染慢性化、持续化的主要原因之一。近年来研究热点逐渐趋向于天然免疫,有学者认为人体天然免疫系统功能受损可能是引起乙型肝炎病毒感染慢性化的重要机制。由于在人感染HBV的自然史中,早期没有临床症状,且HBV需感染5-6周后方才进入复制指数扩增阶段,故而很难去分析人感染HBV早期机体的天然免疫状态。本课题检测乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表达及HBV对THP-1中ZIP2、ZIP8表达的影响分化的巨噬细胞,观察HBV对其ZIP2、ZIP8表达的影响。研究目的：本课题检测乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表达；并用乙肝病毒血清将人单核细胞白血病细胞(THP-1)分化的巨噬细胞进行刺激,观察HBV对其ZIP2、ZIP8表达的影响,以期了解HBV感染过程中ZIP2、ZIP8表达的变化,为HBV持续感染的分子免疫机制提供思路及理论基础。实验方法：一、临床收集41例乙型肝炎患者、23例丙型肝炎患者以及39例正常人的抗凝外周血液样本、原子吸收分光光度计检测血清锌含量、密度梯度离心法分离样本的PBMC,通过Real-time PCR和Western-blot方法检测PBMCs中锌转运体ZIP2、ZIP8的表达。二、以不同乙肝病毒量血清刺激佛波酯(PMA)诱导的人单核细胞白血病细胞(THP-1),实时定量PCR和Westera-blot检测刺激24h和48h后巨噬细胞中ZIP2和ZIP8表达,同时检测细胞因子IL-6和TNF-a的mRNA水平的变化。实验结果：一.Real-time PCR和Western-blot结果显示乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表达量明显低于正常对照组(p0.05)；不同病毒量的乙肝和丙肝患者之间相比,ZIP2和ZIP8的表达均没有差异。二、不同乙肝病毒血清组巨噬细胞中ZIP2和ZIP8的表达在24h和48h较对照组上调,且高病毒含量组表达高于低病毒含量组。刺激48h后,高乙肝血清病毒含量组IL-6的表达相比对照组以及低乙肝病毒血清含量组上调,TNF-a的表达相比对照组以及低乙肝病毒血清含量组下调。结论：本研究在体内外检测了乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表达,结果显示患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表达下调；用不同HBV病毒量血清对巨噬细胞进行刺激,巨噬细胞中ZIP2和ZIP8的表达反而上调,并对细胞因子IL-6和TNF-α的表达也产生了一定的影响。
【关键词】：ZIP2 ZIP8 乙肝 丙肝 THP-1
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.6
【目录】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 符号说明12-14
• 前言14-19
• 材料与设备19-21
• 实验方法21-29
• 结果29-42
• 讨论42-46
• 参考文献46-53
• 致谢53-54
• 攻读学位期间发表的学术论文54-55
• 附件55

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