内质网应激介导的细胞凋亡在砷致大鼠肝损伤及金属硫蛋白保护作用机制探讨

发布时间：2017-05-20 15:27

  本文关键词：内质网应激介导的细胞凋亡在砷致大鼠肝损伤及金属硫蛋白保护作用机制探讨，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)诱导的细胞凋亡在砷中毒大鼠肝损伤发生机制及金属硫蛋白(metallothionein,MT)治疗砷中毒肝损伤中的可能作用。方法:健康清洁级雄性Wistar大鼠24只,体重150~180g,在20~25℃恒温、光照周期12h环境中饲养1周后随机分为3组:对照组、砷中毒模型组、MT治疗组,每组8只。对照组大鼠普通饲料喂养,自由饮用自来水;砷中毒模型组大鼠给予普通饲料喂养,自由饮用含200mg/L的Na As O2自来水溶液;MT治疗组大鼠也给予普通饲料喂养,自由饮用含200mg/L的Na As O2自来水溶液;3组大鼠按照上述处理喂养8周后,对照组继续自由饮用自来水2周,砷中毒模型组及MT治疗组停止饮用Na As O2自来水溶液,改为自由饮用自来水,且MT治疗组开始隔日1次按2ml/100g体重给予浓度为200 mg/L的MT溶液灌胃2周。共计观察10周后处死各组大鼠,取血清测定肝功能生化指标;取部分肝组织匀浆后测定氧化应激指标;取部分肝组织常规切片,HE染色,观察肝组织病理改变;以TUNEL法和流式细胞术检测各组大鼠肝组织细胞凋亡情况;以免疫组化法和Western blot法分别检测肝组织中内质网应激标志蛋白GRP78和诱导凋亡的关键性信号分子CHOP蛋白表达水平。结果:砷中毒模型组大鼠血清ALT、AST水平较正常对照组大鼠明显增高(P0.05),经MT治疗2周后治疗组大鼠血清ALT、AST水平较砷中毒模型组大鼠明显下降(P0.05),但仍然显著高于正常对照组大鼠(P0.05)。砷中毒模型组大鼠肝组织SOD活力明显较正常对照组大鼠降低(P0.05),MT治疗2周后,治疗组大鼠肝组织SOD活力明显较砷中毒模型组大鼠SOD活力回升(P0.05)。肝脏形态学观察可见与正常对照组大鼠肝组织形态学比较,砷中毒模型组大鼠肝细胞不同程度的气球样变性,小叶汇管区有少许炎性细胞浸润;MT治疗2周后,治疗组大鼠肝细胞变性、炎性细胞浸润明显减轻,小叶结构完整,结构与正常对照组大鼠肝小叶结构近似。TUNEL法半定量检测和流式细胞术检测均显示,砷中毒模型组大鼠肝细胞凋亡率明显较对照组增高(P0.05),经MT治疗2周后,治疗组大鼠肝细胞凋亡率较砷中毒模型组大鼠降低(P0.05)。免疫组化方法观察内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP在各组大鼠肝脏表达时发现:对照组大鼠肝组织鲜见GRP78和CHOP阳性表达细胞,砷中毒模型组大鼠肝组织中可见散在的胞浆呈棕黄色染色的阳性细胞,而MT治疗组大鼠肝组织中鲜见GRP78和CHOP阳性表达的细胞。以Western blot方法进一步检测各组大鼠肝脏GRP78和CHOP蛋白表达水平,结果显示砷中毒模型组大鼠肝组织GRP78和CHOP蛋白表达量显著较正常对照组大鼠肝组织增高,差异有显著性(P0.05);MT治疗2周后,治疗组大鼠肝组织GRP78和CHOP蛋白表达量明显较砷中毒模型组大鼠降低(P0.05)。结论:1、肝细胞内质网应激及氧化应激诱导的细胞凋亡机制参与了砷中毒致大鼠肝损伤发生;2、口服MT可通过改善大鼠肝脏氧化应激、减轻肝细胞凋亡而发挥其对砷中毒性肝损伤的保护作用;3、内质网应激诱导细胞凋亡的GRP78-CHOP信号通路参与了MT的砷中毒大鼠肝损伤保护机制。
【关键词】：砷中毒 肝损伤 金属硫蛋白 内质网应激 细胞凋亡
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R595;R575
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 略缩词表9-10
• 引言10-11
• 材料与方法11-22
• 结果22-26
• 讨论26-30
• 结论30-31
• 参考文献31-35
• 综述35-44
• 参考文献41-44
• 作者简历44-45
• 致谢45-46
• 学位论文数据集46

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本文编号：382066