人脐带间充质干细胞旁分泌物质治疗暴发性肝衰竭的实验研究

发布时间：2023-06-28 05:12

　　目的探索人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)旁分泌物质对实验性暴发性肝衰竭大鼠的治疗作用,并研究其对大鼠肝细胞增殖和凋亡的影响。 方法体外分离培养人脐带间充质干细胞,流式细胞仪检测UC-MSCs的表面标志,制备含有UC-MSCs旁分泌物质的条件培养基(MSC-CM),腹腔注射D-氨基半乳糖制备暴发性肝衰竭大鼠模型。实验分组：MSC-CM组、生理盐水(NS)组和促肝细胞生长素(PHGF)组,在模型制备后24h从大鼠尾静脉分别注射三组治疗药物。每组8只大鼠治疗后12h、24h、36h、60h分别内眦取血测定谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)的含量。每组另取5只大鼠在治疗后36h取肝脏组织制备切片进行HE染色、PCNA免疫组织化学染色以及TUNEL染色,检测大鼠肝组织中炎性细胞浸润情况以及肝细胞增殖和凋亡的情况。并在无菌条件下取大鼠肝组织-80℃冷藏,提取RNA, RT-PCR法检测大鼠肝组织由HGF、EGF、HB-EGF、TNF-a、OSM等基因的表达情况。同时取大鼠外周血,ELISA法检测大...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、人脐带间充质干细胞的分离培养与鉴定
    1.1 对象和方法
        1.1.1 研究对象
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
        1.1.4 主要溶液
        1.1.5 脐带间充质干细胞的分离、接种与培养
        1.1.6 流式细胞仪检测细胞表面标志
        1.1.7 统计学方法
    1.2 结果
        1.2.1 UC-MSCs体外生长情况及形态学观察
        1.2.2 UC-MSCs免疫表型鉴定
    1.3 讨论
        1.3.1 脐带间充质干细胞
        1.3.2 脐带间充质干细胞的分离培养及鉴定
        1.3.3 UC-MSCs与BM-MSCs生物学特性比较
        1.3.4 脐带间充质干细胞的优势
    1.4 小结
二、人脐带间充质干细胞旁分泌物质治疗暴发性肝衰竭的实验研究
    2.1 对象和方法
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要溶液
        2.1.5 暴发性肝衰竭(FHF)大鼠的制备
        2.1.6 暴发性肝衰竭(FHF)大鼠的治疗
        2.1.7 ELISA法检测大鼠血清中细胞因子表达情况
        2.1.8 大鼠肝组织苏木素-伊红(HE)染色
        2.1.9 大鼠肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)染色
        2.1.10 大鼠肝组织TUNEL染色
        2.1.11 RT-PCR检测大鼠肝组织中基因表达情况
        2.1.12 统计学方法
    2.2 结果
        2.2.1 FHF大鼠肝脏组织病理观察
        2.2.2 脐带MSC-CM对FHF大鼠肝功能的影响
        2.2.3 FHF大鼠血清中细胞因子检测结果
        2.2.4 FHF大鼠肝脏病理改变
        2.2.5 FHF大鼠肝脏PCNA染色结果
        2.2.6 FHF大鼠肝脏TUNEL染色结果
        2.2.7 各组FHF大鼠基因表达结果
        2.2.8 三组大鼠生存分析结果
    2.3 讨论
        2.3.1 D-GalN致大鼠FHF的原理
        2.3.2 脐带间充质干细胞旁分泌物质
        2.3.3 MSC-CM对FHF大鼠肝功能的修复
        2.3.4 MSC-CM对FHF大鼠血清中细胞因子的影响
        2.3.5 MSC-CM对FHF大鼠肝组织病理改变情况
        2.3.6 MSC-CM对FHF大鼠肝细胞再生的影响
        2.3.7 MSC-CM对FHF大鼠肝细胞凋亡的影响
        2.3.8 促肝细胞生长素(PHGF)
    2.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 人脐带间充质干细胞旁分泌物质的作用及对肝功能衰竭的影响
    综述参考文献
致谢



本文编号：3836047