内毒素脂多糖在慢性酒精性胰腺炎巨噬细胞介导炎症反应的调节作用

发布时间：2017-05-23 06:30

  本文关键词：内毒素脂多糖在慢性酒精性胰腺炎巨噬细胞介导炎症反应的调节作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的：单核/巨噬细胞通过分泌致炎因子化学趋化因子在天然免疫和获得性免疫介导的炎症过程发挥重要的作用，革兰氏细菌内毒素脂多糖(LPS)作用于Toll样受体4(TLR4)激活巨噬细胞被认为在慢性酒精性胰腺炎(CAP)的发病过程中起着关键的角色。本研究的目的在于测定CAP患者血清的致炎因子和化学趋化因子及LPS在人类巨噬细胞分泌炎症因子的作用，进而评价巨噬细胞激活在CAP发病的作用。 方法：本研究收集了我院体检中心25名健康成年人的血液标本和24例慢性酒精性胰腺炎(chronic alcoholic pancreatitis, CAP)患者于发病48小时内的血液标本。采用分光光度法检测血浆内毒素脂多糖(LPS)水平及化学趋化因子MCP-1、MIP-1α、Rantes及纤维源性因子TGF-β1的水平。采用淋巴细胞分离液分离人末梢血单核细胞，将其铺板于六孔板中，用含10%FBSRPMI/1640培养基培养。将贴壁的单核细胞继续用上述培养基培养，并加入10ng/ml的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，6天后获得组织巨噬细胞表型。将其分为正常组，酒精组，LPS组，酒精+LPS组，，继续培养24小时。采用免疫组化方法检测巨噬细胞标志F4/80和CD14抗原。采用ELISA法分别检测血清和巨噬细胞培养上清MCP-1、MIP-1α、Rantes、TGF-β1水平。 结果：本研究结果显示：24例CAP患者中，15例(62%)伴有内毒素血症（血浆LPS水平＞正常值限2倍）。血清化学趋化因子MCP-1、MIP-1α、Rantes与纤维源性因子TGF-β1在伴有内毒素血症CAP患者的水平明显高于无内毒素血症的患者，分别升高3.7倍、4.1倍、1.7倍和1.3倍。体外实验结果显示单核细胞经GM-CSF6天的诱导，表达F4/80和CD14，98%以上转化为巨噬细胞。酒精加LPS处理巨噬细胞后其上清MCP-1、MIP-1α、Rantes及TGF-β1较对照组，单纯酒精组，单纯LPS组明显升高（P＜0.01）。酒精加LPS组巨噬细胞培养上清MCP-1、MIP-1α、Rantes及TGF-β1水平分别是单纯酒精组水平的1.7倍、2.8倍、3.4倍和1.5倍。 结论：本研究成功建立了巨噬细胞体外培养的内毒素和酒精模型，显示了LPS诱导巨噬细胞产生化学趋化因子及纤维源性因子，由此推测其在CAP炎症及纤维化发病过程中发挥作用。
【关键词】：慢性胰腺炎 脂多糖 TLR4信号通路 巨噬细胞 ELISA
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R576
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文缩略词10-12
• 第1章 绪论12-13
• 第2章 综述 内毒素脂多糖在慢性酒精性胰腺炎巨噬细胞13-21
• 2.1 TLR4 与其配体的结构特征、分布及功能13-16
• 2.1.1 TLR4 与其配体的结构特征及分布13-15
• 2.1.2 LPS-TLR4 的信号传导通路15-16
• 2.2 LPS-TLR4 信号通路与胰腺炎16-18
• 2.2.1 TLR4 在急性酒精性胰腺炎的作用16-17
• 2.2.2 TLR4 在慢性酒精性胰腺炎的作用17-18
• 2.3 胰腺炎症、纤维化的细胞学基础18-20
• 2.3.1 胰腺星状细胞在胰腺炎症、纤维化的作用18
• 2.3.2 巨噬细胞在胰腺炎症、纤维化的调节作用18-20
• 2.4 前景与展望20-21
• 第3章 实验材料与方法21-36
• 3.1 实验试剂21-22
• 3.2 实验仪器22-23
• 3.3 实验方法23-35
• 3.3.1 病例选择及标本采集23-24
• 3.3.2 光度法血浆 LPS 浓度检测24
• 3.3.3 ELISA 检测人血清 MCP-1、MIP-1α、Rantes 及 TGF-β124-26
• 3.3.4 人末梢血单个细胞的分离与培养方法26-27
• 3.3.5 人巨噬细胞的识别27-34
• 3.3.6 LPS 对巨噬细胞 TLR4 和 CD14 表达影响的检测方法：34
• 3.3.7 ELISA 检测酒精及 LPS 作用下巨噬细胞合成和分泌细胞因子34-35
• 3.7 统计学处理35-36
• 第4章 实验结果36-41
• 4.1 CAP 患者血浆中 LPS 及细胞因子水平变化36
• 4.2 伴有内毒素血症的 CAP 患者血浆 LPS 与血清细胞因子相关性分析36-37
• 4.3 巨噬细胞的转化、识别及 LPS 对其影响37-41
• 第5章 讨论41-45
• 第6章 结论45-46
• 参考文献46-52
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果52-53
• 致谢53

【参考文献】

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  本文关键词：内毒素脂多糖在慢性酒精性胰腺炎巨噬细胞介导炎症反应的调节作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：387094