阿司匹林对酸和胆盐诱导的Barrett食管患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达的影响

发布时间：2024-02-05 20:09

　　目的探讨阿司匹林对酸和胆盐诱导的Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达的影响。方法将合并BE的胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)患者的食管鳞状细胞(NES-B细胞)和无合并BE的GERD患者的食管鳞状细胞(NES-G细胞)暴露于酸和胆盐中,分别加入和不加入阿司匹林。采用蛋白质印迹法检测细胞内p65、p-p65、p50、IκB、p-IκB的蛋白表达;染色质免疫沉淀法检测p50和p65与CDX2启动子DNA的结合活性;荧光素酶报告基因检测NF-κB/p65的转录活性;免疫荧光技术检测p65蛋白的核转位情况;qRT-PCR法检测CDX2 mRNA的表达。结果 NES-B和NES-G细胞在酸和胆盐暴露后均能激活NF-κB,但与NES-G细胞相比,NES-B细胞表现出更高水平的IκB和p65磷酸化,以及更强的NF-κB转录活性。阿司匹林阻断了酸和胆盐诱导的NES-B细胞中IκB磷酸化、p65核转位、CDX2启动子激活和CDX2表达。结论阿司匹林对酸和胆盐诱导的BE患者食管...

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【部分图文】：

图1酸、胆盐和酸性胆盐暴露后NES-B和NES-G细胞中胞质和胞核p65和p50蛋白的表达水平变化

与未经处理的对照组比较,NES-B细胞和NES-G细胞具有相似水平的细胞质和细胞核p65和p50蛋白。用酸、胆盐或两者联合处理NES-B细胞,可以消除p65和p50的胞浆水平,并导致细胞核中p50和p65的水平显著升高。与此相反,用酸和胆盐处理NES-G细胞,细胞质中p50和p6....

图2酸、胆盐和酸性胆盐暴露后NES-G细胞中p50或p65与CDX2启动子的DNA结合活性

对p50进行免疫沉淀,然后对p65进行蛋白质印迹,以证实NF-κB蛋白在NES-G和NES-B细胞系中形成异二聚体。结果显示,未受刺激的两种细胞均表现出p50/p65异二聚体形成。暴露于酸、胆盐和酸性胆盐后,NES-G细胞中的异二聚体形成量增加不明显,而NES-B细胞中的异二聚体....

图3酸、胆盐和酸性胆盐暴露后NES-G和NES-B细胞质中p50/p65异二聚体形成情况

图2酸、胆盐和酸性胆盐暴露后NES-G细胞中p50或p65与CDX2启动子的DNA结合活性2.3酸和胆盐对NES-B细胞和NES-G细胞NF-κB/p65的转录活性的影响

图4酸、胆盐和酸性胆盐暴露后NES-G和NES-B细胞质中与IκB和PKAc结合的p65蛋白水平的变化

暴露于酸、胆盐和酸性胆盐后,NES-B细胞的IκB(Ser32/36)和p65(Ser276)磷酸化水平明显升高。在NES-G细胞中这些相同的暴露导致IκB的磷酸化只有较少的增加,而p65的磷酸化仅有极少的增加(见图5)。利用NF-κB荧光素酶报告基因构建体,发现酸性胆盐处理....

本文编号：3896133