乙型肝炎病毒感染模型的建立及其早期入侵的分子机制的研究
发布时间：2024-04-08 03:20
乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染仍旧是中国乃至全球极为重大的公共卫生与健康问题,平均每年死于该病毒感染的人口大约有一百万。目前全世界累计有20亿左右的人口感染过或者正在感染HBV,其中有3500万人属于慢性乙肝患者,肝脏内病毒的复制与病毒复制所诱导的长期炎症反应使得这些人群更加容易受到肝硬化,肝癌和肝衰竭等疾病的严重威胁。据悉,全世界超过50%的肝癌都是由HBV感染造成的,其中丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus, HDV)和HBV共同感染的患者的病情恶化尤为快速和严重。尽管有高效的疫苗和一定的治疗手段,乙型肝炎的防治工作任重而道远,现有的防治体系仍面临着巨大的挑战,同时HDV感染的治疗手段也是很缺乏的。因此,对HBV的基础研究急需进一步深入和加强,其中HBV对细胞早期入侵过程中的分子机制的探索和研究显得尤为迫切和重要。 在体内HBV只能感染人,黑猩猩和类灵长类小动物树鼩(Tupaia belangeri chinenesis, Northern Treeshrew)。可以被HBV体外感染的细胞只有少数几种,其中原代树鼩肝细胞(Primary...
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
第一章 前言
第一节 HBV概述
1.1 HBV的发现过程及其种属归类
1.2 HBV的血清型和基因型
1.3 HBV的基因组结构及其转录调控
第二节 HBV感染模型及其研究意义
第二章 实验材料与实验方法
第一节 树鼩的饲养
第二节 PTH的分离纯化与培养
2.1 灌注用手术器械等实验器材的准备
2.2 灌注母液的配置
2.3 PTH贴壁培养基配方
2.4 PTH维持培养基配方
2.5 用大鼠鼠尾Ⅰ型胶原包被细胞培养皿
2.6 两步法PTH灌注流程
2.7 树鼩肝星状细胞的分离和培养
2.8 细胞冻存与复苏
2.9 树鼩原代成纤维细胞的分离和培养
2.10 PTH或者Huh7与HSC或者PTF细胞的共同培养
第三节 HBV,HDV和WMHBV的制备
3.1 从病人血清中超速离心纯化HBV
3.2 Huh7细胞的培养
3.3 用脂质体转染的方法从Huh7细胞中制备HDV
3.4 用脂质体转染的方法从Huh7细胞中制备HBV或者WMHBV
3.5 HDV的浓缩与纯化方式介绍
3.6 确定HDV的浓度
第四节 三种病毒对PTH的侵染和侵染标志物的检测
4.1 HBV侵染PTH实验简介
4.2 HDV和WMHBV侵染PTH实验简介
4.3 ELISA检测HBsAg或者HBeAg
4.4 检测PTH内病毒RNA的表达
4.5 用免疫荧光染色研究PTH内病毒蛋白的表达情况
4.6 用免疫印迹法研究PTH内特定蛋白的表达
第三章 实验结果与分析讨论
第一节 PTH的分离与培养
1.1 PTH分离的结果与讨论
1.2 PTH培养的细胞状态和功能
1.3 PTH对三种病毒的感染结果分析
1.4 PTH体外感染模型的条件优化
1.5 PTH体外感染模型建立的意义
1.6 HBV,HDV和WMHBV共同功能性受体的发现,确定和意义
第二节 RTK-PI3K-AKT信号转导途径对病毒感染的作用
2.1 EGFR和HGFR参与了HBV早期入侵的过程
2.2 磷脂酰肌醇3激酶也参与了HBV早期入侵的过程
2.3 蛋白激酶B也参与了HBV早期入侵的过程
2.4 RTK-PI3K-AKT信号转导途径参与HBV入侵的机理探讨
第三节 探索HBV入侵所需的相关蛋白
3.1 用免疫共沉淀的方法寻找HBV受体的介绍
3.2 表达纯化和修饰饵蛋白
3.3 紫外光激活的共价交联手段的运用
3.4 运用光激活的共价交联手段进行亲和纯化的经验总结
3.5 将preS1-mFc表达质粒转染到PTH后用Fc亲和纯化
第四节 建立人NTCP的转基因小鼠模型
小结
附录
中英文对照表
59-RBD-his蛋白序列
参考文献
论文发表和专利申请
致谢
本文编号：3948407
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
第一章 前言
第一节 HBV概述
1.1 HBV的发现过程及其种属归类
1.2 HBV的血清型和基因型
1.3 HBV的基因组结构及其转录调控
第二节 HBV感染模型及其研究意义
第二章 实验材料与实验方法
第一节 树鼩的饲养
第二节 PTH的分离纯化与培养
2.1 灌注用手术器械等实验器材的准备
2.2 灌注母液的配置
2.3 PTH贴壁培养基配方
2.4 PTH维持培养基配方
2.5 用大鼠鼠尾Ⅰ型胶原包被细胞培养皿
2.6 两步法PTH灌注流程
2.7 树鼩肝星状细胞的分离和培养
2.8 细胞冻存与复苏
2.9 树鼩原代成纤维细胞的分离和培养
2.10 PTH或者Huh7与HSC或者PTF细胞的共同培养
第三节 HBV,HDV和WMHBV的制备
3.1 从病人血清中超速离心纯化HBV
3.2 Huh7细胞的培养
3.3 用脂质体转染的方法从Huh7细胞中制备HDV
3.4 用脂质体转染的方法从Huh7细胞中制备HBV或者WMHBV
3.5 HDV的浓缩与纯化方式介绍
3.6 确定HDV的浓度
第四节 三种病毒对PTH的侵染和侵染标志物的检测
4.1 HBV侵染PTH实验简介
4.2 HDV和WMHBV侵染PTH实验简介
4.3 ELISA检测HBsAg或者HBeAg
4.4 检测PTH内病毒RNA的表达
4.5 用免疫荧光染色研究PTH内病毒蛋白的表达情况
4.6 用免疫印迹法研究PTH内特定蛋白的表达
第三章 实验结果与分析讨论
第一节 PTH的分离与培养
1.1 PTH分离的结果与讨论
1.2 PTH培养的细胞状态和功能
1.3 PTH对三种病毒的感染结果分析
1.4 PTH体外感染模型的条件优化
1.5 PTH体外感染模型建立的意义
1.6 HBV,HDV和WMHBV共同功能性受体的发现,确定和意义
第二节 RTK-PI3K-AKT信号转导途径对病毒感染的作用
2.1 EGFR和HGFR参与了HBV早期入侵的过程
2.2 磷脂酰肌醇3激酶也参与了HBV早期入侵的过程
2.3 蛋白激酶B也参与了HBV早期入侵的过程
2.4 RTK-PI3K-AKT信号转导途径参与HBV入侵的机理探讨
第三节 探索HBV入侵所需的相关蛋白
3.1 用免疫共沉淀的方法寻找HBV受体的介绍
3.2 表达纯化和修饰饵蛋白
3.3 紫外光激活的共价交联手段的运用
3.4 运用光激活的共价交联手段进行亲和纯化的经验总结
3.5 将preS1-mFc表达质粒转染到PTH后用Fc亲和纯化
第四节 建立人NTCP的转基因小鼠模型
小结
附录
中英文对照表
59-RBD-his蛋白序列
参考文献
论文发表和专利申请
致谢
本文编号：3948407
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3948407.html
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