骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞增殖、凋亡和TGFβ1表达的研究

发布时间：2024-04-11 03:30

　　目的：目前治疗终末期肝病的最有效的方法是肝移植,但是由于供肝短缺、移植后免疫排斥等一系列问题,该疗法无法在临床广泛展开,因此需要寻求新的治疗方法。多项研究表明,干细胞移植能够达到缓解和改善肝硬化病情的效果。骨髓间充质干细胞由于取材方便、数量多等优点,成为干细胞理想的来源之一。本实验通过体外细胞非接触式共培养体系来研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)治疗肝硬化的机制。 方法：人BMSCs细胞株、人肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)株(LX2)复苏后传代使用。四甲基偶氮哇蓝(MTT)法测定两种细胞培养1-9天的0D值,绘制生长曲线。在6孔塑料细胞培养板内架上半透膜(transwell insert),建立上下双层细胞共培养体系,上层接种BMSCs(1×105cells/mL)2mL,下层接种HSCs(1×105cells/mL)2mL,常规培养。实验分组：①对照组：HSCs单独培养；②实验组：BMSCs与HSCs共培养。以上体系培养观察24h和48h。于倒置相差显微镜下动态观察HSCs...

【文章页数】：40 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 骨髓MSC在肝硬化中的研究进展
    1.2 肝纤维化与TGF β/Smad信号传导通路
第二章 材料与方法
    2.1 试剂与仪器
    2.2 溶液与试剂配制
    2.3 细胞复苏
    2.4 细胞培养
    2.5 细胞冻存
    2.6 细胞计数
    2.7 实验分组
    2.8 MTT法测定BMSCs与HSCs的生长曲线
    2.9 MTT法检测HSCs的增殖
    2.10 流式细胞仪检测HSCs凋亡
    2.11 HOECHST染色显示细胞凋亡小体
    2.12 ELISA检测TGFβ 1浓度
    2.13 HSCs总RNA提取和RT-PCR
    2.14 HSCs总蛋白提取和WESTERN BLOT检测
    2.15 统计学方法
第三章 结果
    3.1 BMSCs和HSCs的培养情况
    3.2 BMSCs对HSCs增殖的影响
    3.3 BMSCs对HSCs凋亡的影响
    3.4 HOECHST染色结果
    3.5 上清液中TGF β1浓度的测定
    3.6 共培养后TGF β 1、smad 7 mRNA的表达
    3.7 共培养后TGF β 1、smad 7蛋白的表达
第四章 讨论
第五章 研究展望
参考文献
在校期间研究成果
致谢



本文编号：3950809