肝再生增强因子对大鼠肝纤维化的治疗作用及机制研究
发布时间：2024-05-10 02:25
肝纤维化(liver fibrosis)是各种慢性肝病的共同病理过程,严重的肝纤维化可发展成肝硬化甚至肝癌。在我国,肝纤维化、肝硬化多与病毒性肝炎有关,往往是由于慢性病毒性肝炎迁延难愈而造成的。针对慢性肝炎肝纤维化的病理特征,本文采用CCl4和PS诱导的大鼠肝纤维化模型,研究ALR对大鼠肝纤维化的治疗作用并探讨其抗肝纤维化的机制。 研究发现在各种急、慢性肝损伤动物模型中,ALR可促进肝细胞再生,减轻肝损伤,改善肝功能,增加动物存活率和存活时间。本文采用尾静脉注射pcDNA3.1-hALR重组质粒治疗毒物诱导和免疫性大鼠肝纤维化。 研究结果显示,ALR基因治疗可明显减轻大鼠肝损伤和肝纤维化,其机制可能是抑制肝细胞内氧化应激,下调各种致纤维化因子,阻止肝星状细胞的活化。ALR治疗可显著减少α-SMA的表达,减少肝内活性氧簇水平,并下调TGF-β1、PDGF-BB和TIMP-1的表达。与肝硬化模型组大鼠相比,治疗组大鼠的血清AST, ALT和AKP水平明显降低,但是,血清ALB明显高于模型组大鼠而接近健康对照组。血清生化指标的变化与肝组织病理检查结果相符,治疗组大鼠肝组织H&E染色显...
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩写
第一章 前言
1.1 肝脏
1.2 肝纤维化
1.3 基因治疗肝纤维化
1.4 ALR与肝纤维化治疗
1.5 研究意义
第二章 ALR重组质粒的制备
2.1 实验材料
2.1.1 菌株、质粒及载体
2.1.2 酶类
2.1.3 试剂盒
2.1.4 化学试剂
2.1.5 分子量标准
2.1.6 培养基等
2.1.7 仪器
2.2 实验方法
2.2.1 真核表达载体的构建
2.2.2 pcDNA3.1-hALR重组质粒的鉴定
2.2.3 pcDNA3.1-hALR重组质粒的大量提取(试剂盒法)
2.3 实验结果
2.3.1 重组质粒酶切鉴定结果
2.3.2 阳性克隆序列测定结果
2.3.3 质粒大量提取及酶切鉴定结果
2.4 讨论
第三章 ALR对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 主要试剂及试剂盒
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 肝纤维化大鼠模型的建立
3.2.2 质粒DNA大量提取
3.2.3 肝纤维化大鼠的治疗
3.2.4 大鼠肝脏组织病理学检查
3.2.5 饱和苦味酸-天狼星红染色
3.2.6 肝组织羟基脯氨酸含量测定
3.2.7 血清学指标测定
3.2.8 抗氧化指标测定
3.2.9 ATP酶活力测定
3.2.10 免疫组化
3.2.11 RNA制备和分析
3.2.12 统计学方法
3.3 实验结果
3.3.1 实验动物一般情况
3.3.2 大鼠肝脏裸眼观察
3.3.3 肝系数和脾系数分析
3.3.4 肝组织病理学检查
3.3.5 胶原含量分析
3.3.6 肝脏组织病理学分级
3.3.7 ALR对大鼠肝功能指标的影响
3.3.8 基因转染后ALR在大鼠肝脏中的表达
3.3.9 肝星状细胞的激活
3.3.10 ALR对致纤因子TGF-β1和PDGF-BB表达的影响
3.3.11 ALR对大鼠肝组织MDA、SOD及GPx的影响
3.3.12 ALR对肝细胞ATP酶的影响
3.4 讨论
第四章 ALR对PS诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.2.1 肝纤维化动物模型的建立
4.2.2 质粒DNA大量提取
4.2.3 肝纤维化大鼠的治疗
4.2.4 大鼠肝脏组织病理学和其他各项指标检查
4.2.5 统计学方法
4.3 实验结果
4.3.1 实验动物一般情况
4.3.2 大鼠肝脏裸眼观察
4.3.3 肝系数和脾系数分析
4.3.4 肝组织病理学检查及肝纤维化病理分级
4.3.5 胶原含量分析
4.3.6 ALR对PS诱导的肝纤维化大鼠肝功能的影响
4.3.7 肝组织中α-SMA的分布及表达
4.3.8 ALR对致纤因子表达的影响
4.3.9 ALR对大鼠肝脏MDA和SOD的影响
4.4 讨论
全文总结
参考文献
致谢
附录
附件
本文编号：3968616
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩写
第一章 前言
1.1 肝脏
1.2 肝纤维化
1.3 基因治疗肝纤维化
1.4 ALR与肝纤维化治疗
1.5 研究意义
第二章 ALR重组质粒的制备
2.1 实验材料
2.1.1 菌株、质粒及载体
2.1.2 酶类
2.1.3 试剂盒
2.1.4 化学试剂
2.1.5 分子量标准
2.1.6 培养基等
2.1.7 仪器
2.2 实验方法
2.2.1 真核表达载体的构建
2.2.2 pcDNA3.1-hALR重组质粒的鉴定
2.2.3 pcDNA3.1-hALR重组质粒的大量提取(试剂盒法)
2.3 实验结果
2.3.1 重组质粒酶切鉴定结果
2.3.2 阳性克隆序列测定结果
2.3.3 质粒大量提取及酶切鉴定结果
2.4 讨论
第三章 ALR对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 主要试剂及试剂盒
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 肝纤维化大鼠模型的建立
3.2.2 质粒DNA大量提取
3.2.3 肝纤维化大鼠的治疗
3.2.4 大鼠肝脏组织病理学检查
3.2.5 饱和苦味酸-天狼星红染色
3.2.6 肝组织羟基脯氨酸含量测定
3.2.7 血清学指标测定
3.2.8 抗氧化指标测定
3.2.9 ATP酶活力测定
3.2.10 免疫组化
3.2.11 RNA制备和分析
3.2.12 统计学方法
3.3 实验结果
3.3.1 实验动物一般情况
3.3.2 大鼠肝脏裸眼观察
3.3.3 肝系数和脾系数分析
3.3.4 肝组织病理学检查
3.3.5 胶原含量分析
3.3.6 肝脏组织病理学分级
3.3.7 ALR对大鼠肝功能指标的影响
3.3.8 基因转染后ALR在大鼠肝脏中的表达
3.3.9 肝星状细胞的激活
3.3.10 ALR对致纤因子TGF-β1和PDGF-BB表达的影响
3.3.11 ALR对大鼠肝组织MDA、SOD及GPx的影响
3.3.12 ALR对肝细胞ATP酶的影响
3.4 讨论
第四章 ALR对PS诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.2.1 肝纤维化动物模型的建立
4.2.2 质粒DNA大量提取
4.2.3 肝纤维化大鼠的治疗
4.2.4 大鼠肝脏组织病理学和其他各项指标检查
4.2.5 统计学方法
4.3 实验结果
4.3.1 实验动物一般情况
4.3.2 大鼠肝脏裸眼观察
4.3.3 肝系数和脾系数分析
4.3.4 肝组织病理学检查及肝纤维化病理分级
4.3.5 胶原含量分析
4.3.6 ALR对PS诱导的肝纤维化大鼠肝功能的影响
4.3.7 肝组织中α-SMA的分布及表达
4.3.8 ALR对致纤因子表达的影响
4.3.9 ALR对大鼠肝脏MDA和SOD的影响
4.4 讨论
全文总结
参考文献
致谢
附录
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本文编号：3968616
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