自噬在急性胰腺炎发病过程中的作用

发布时间：2017-05-27 01:01

  本文关键词：自噬在急性胰腺炎发病过程中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景 急性胰腺炎是外科常见的急腹症，其发病原因尚不清楚，总体死亡率约为5%，其中重症坏死性胰腺炎死亡率高达35~50%。目前大多研究者认为胰酶原在胰腺细胞内非正常激活，是造成急性胰腺炎发生的原因。然而胰腺细胞内的胰酶原又是如何激活的，目前也没有明确阐明，有研究报道自噬参与到该过程中，可是，自噬在该过程中究竟是起到保护作用还是损害作用，尚存在很大争议。 目的 探索自噬在急性胰腺炎发病过程中的作用，阐述急性胰腺炎的发病机制。 方法 1.动物体内观察胰腺炎时自嗜的改变：采用C57小鼠腹腔间断注射雨蛙素诱导急性胰腺炎模型，检测血清淀粉酶、干湿重和胰腺组织病理变化评价胰腺炎损伤度，通过Western-blot检测自噬特异蛋白LC3及胰腺组织透射电镜检测，对比正常及饥饿组小鼠，观察自噬在胰腺炎中的变化。2.建立胰腺炎细胞模型，观察其自嗜的改变：雨蛙素刺激AR42J细胞诱导胰腺炎细胞模型，通过Western-blot及免疫荧光检测自噬特异蛋白LC3，观察雨蛙素作用于腺体细胞后自噬的改变。3.雨蛙素诱导自噬对胰腺炎细胞模型的影响：不同浓度雨蛙素刺激胰腺细胞或者同一雨蛙素浓度刺激胰腺细胞不同时间后，观察细胞毒性、细胞活性及凋亡等细胞状态。4.自噬对胰酶活化的影响：不同浓度雨蛙素刺激胰腺细胞或者同一雨蛙素浓度刺激胰腺细胞不同时间，并给予3甲基腺嘌呤、羟氯喹、E64D在三个不同环节抑制自噬后，采用BZiPAR（胰酶荧光底物），检测胰酶活化情况，了解胰酶活化与自嗜的关系；5.观察不同严重程度胰腺炎小鼠模型自嗜变化间断腹腔注射CR，，通过不同的注射次数，诱导出不同严重程度的急性胰腺炎动物模型，用Western-blot检测自噬特异蛋白LC3，观察自噬同胰腺炎严重程度的关系。 结果 1.胰腺炎动物模型自噬体数目增多，包绕酶原颗粒并降解。2.雨蛙素诱导胰腺炎细胞模型，自噬体增加，自噬功能障碍。3.雨蛙素刺激并不能直接引起AR42J细胞坏死或凋亡，相反，雨蛙素反而会促进AR42J细胞增殖，这种增殖作用是可以通过抑制自噬来抑制的。4.在雨蛙素的刺激下，AR42J细胞的胰酶原部分活化，酶原活化并不能随时间的延长而累积，也不随雨蛙素浓度增加而提高；不同环节抑制自噬，均可抑制胰酶活化。5.自噬障碍程度同胰腺炎的严重程度呈明显正相关，当胰腺炎表现越重，自噬障碍越明显。 结论 本研究证实了自噬障碍参与急性胰腺炎胰酶原的活化，但单纯自噬障碍引起的胰酶活化，并不能进一步引起胰腺细胞凋亡或坏死；然而雨蛙素诱导的急性胰腺炎动物模型，胰腺组织可出现坏死，并且自噬障碍程度同疾病的严重程度呈明显正相关。因此我们推测，当自噬障碍后，能通过某种机制（可能是激活炎症系统），而非胰酶活化，损伤胰腺组织，进一步加重疾病病情。
【关键词】：急性胰腺炎 自噬 雨蛙素 AR42J
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R576
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 文献回顾13-20
• 引言20-21
• 实验一 动物体内观察胰腺炎时自嗜的改变21-28
• 1. 材料21-22
• 2. 方法22-24
• 3. 结果24-25
• 4. 讨论25-28
• 实验二 建立胰腺炎细胞模型，观察其自嗜的改变28-32
• 1. 材料28
• 2. 方法28-29
• 3. 结果29-30
• 4. 讨论30-32
• 实验三 雨蛙素诱导自噬对胰腺炎细胞模型的影响32-41
• 1. 材料32
• 2. 方法32-34
• 3. 结果34-38
• 4. 讨论38-41
• 实验四 自噬对胰酶活化的影响41-46
• 1. 材料41
• 2. 方法41-42
• 3. 结果42-43
• 4. 讨论43-46
• 实验五 自噬在不同程度小鼠急性胰腺炎模型中的变化46-50
• 1. 材料46
• 2. 方法46-47
• 3. 结果47-48
• 4. 讨论48-50
• 小结50-51
• 参考文献51-58
• 个人简历和研究成果58-59
• 致谢59

【共引文献】

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本文编号：398459