乙醇脱氢酶Ⅰ对外源性刺激肝星状细胞活化的影响

发布时间：2024-06-30 18:55

　　目的目前,全球范围内肝脏疾病患者超过13亿,其中10%-15%的慢性肝病患者在5-10年后会发生肝纤维化,并进一步发展为肝硬化甚至肝癌。我们前期结果表明人纤维化组织中乙醇脱氢酶I(ADHI)活性明显升高,而异常激活的肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生的关键,ADHI在HSC活化中的作用尚未见报道。方法本研究首先构建ADHI真核表达载体,建立ADHI高表达及沉默的大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)模型。并分别用乙醇和非乙醇:LPS、TGF-β1进行激活。通过Real-time PCR和Western-blot检测ADHI的表达、纤维化指标Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA水平,分析外源性激活HSC-T6过程中ADHI的表达,以及ADHI表达变化对有、无外源刺激HSC活化相关因子表达的影响。结果乙醇与非乙醇(TGF-β1、LPS)均促进HSC-T6中ADHI的表达(P<0.05)。乙醇与非乙醇刺激ADHI高表达组后,COL1A1 mRNA水平明显升高(P<0.01),α-SMA mRNA水平在24h明显升高(P<0.001),48h无明...

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【部分图文】：

图1PEGFP-N1质粒图谱

.2ADHI真核表达载体构建.2.1PCR特异性扩增ADHI基因.2.1.1扩增ADHI基因根据ADHI(GenBankAccession:NM_019286.4)基因以及PEGFP-N1质粒多克隆酶切位点MCS（图1），利用引物设计软件CE....

图2ADHI的PCR扩增效率及特异性（1%的琼脂糖凝胶电泳，M:DNAMaker10000bp；55～65℃：PCR的退火温度梯度）

PCR扩增效率及特异性（1%的琼脂糖凝胶电泳，M:DNAMakCR的退火温度梯度）P-ADHI真核表达载体的构建因ADHI和pEGFP-N1质粒分别经EcoRI和HindIII双酶胶电泳纯化（图3）后，按照上述方法中的比例加入接后，转化感受态细胞，鉴定....

图3胶回收纯化的凝胶电泳图（M:10000bpDNAMaker；泳道1：pEGFP-N1质粒；泳道2：目的基因ADHI）

约为1148bp，梯度（55℃-65℃）退火温度下，ADHI的2）。PCR扩增效率及特异性（1%的琼脂糖凝胶电泳，M:DNAMaR的退火温度梯度）P-ADHI真核表达载体的构建因ADHI和pEGFP-N1质粒分别经EcoRI和HindIII双胶电....

图4重组质粒的鉴定（M:10000bpDNAMaker；A：pEGFP-ADHI重组质粒的连接效率，泳道1：pEGFP-N1质粒；泳道2～9：pEGFP-ADHI质粒；B：pEGFP-ADHI质粒双酶切产

4重组质粒的鉴定（M:10000bpDNAMaker；A：pEGFP-ADHI重组质粒的连接效率道1：pEGFP-N1质粒；泳道2~9：pEGFP-ADHI质粒；B：pEGFP-ADHI质粒双酶切的鉴定，泳道1，2：pEGFP-ADHI质粒）.3.2重组质....

本文编号：3998938