IL-17A诱导EMT反应参与实验性结肠炎肠纤维化

发布时间：2025-03-19 06:42

　　目的:克罗恩病(Crohn’s disease,CD)是一种病因尚不明确的慢性非特异性肠道炎症性病变,该病呈慢性经过,反复发作,逐渐形成肠壁纤维化,导致肠蠕动功能下降,甚至肠腔狭窄,肠梗阻。现有的药物只能减轻炎症和改善症状,并不能改善肠纤维化。因此探索肠纤维化发病的分子机制以延缓或阻断纤维化发生发展进程的策略,具有重要的实际意义。IL-17A是一种炎性细胞因子,其表达水平异常被认为是多种急慢性疾病发生发展的潜在诊断标志。研究证实CD患者肠黏膜组织中有大量的Th17细胞浸润,且Th17及IL-17A水平较正常组明显增高。但IL-17A是否参与CD肠纤维化的发生发展目前少见报道。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在组织纤维化发生中的作用越来越受到重视。上皮细胞可发生EMT,其细胞表型和功能发生改变,上皮细胞标志物消失,取而代之的是大量纤维化性间质细胞标志物形成,并获得产生大量胶原蛋白和纤维连接蛋白的能力,使ECM沉积,促进纤维化形成。本研究主要探讨IL-17A是否参与CD相关肠纤维化及其可能的作用机制。方法:1、收集2012年8月至20...

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【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分：IL-17A在CD患者肠黏膜组织中的表达及与EMT指标相关性
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 临床组织
            2.1.2 药品与试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 Real-timePCR法检测临床肠黏膜活检组织中IL-17A及EMT相关指标的mRNA转录水平
            2.2.2 Western免疫印迹分析临床组织中IL-17A及EMT相关指标的蛋白表达水平
        2.3 统计学处理
    3 实验结果
        3.1 IL-17AmRNA及蛋白表达水平在CD及对照组患者肠黏膜活检组织中的变化
        3.2 E-cadherinmRNA及蛋白表达水平在CD及对照组患者肠黏膜活检组织中的变化
        3.3 vimentinmRNA及蛋白表达水平在CD及对照组患者肠黏膜活检组织中的变化
        3.4 snailmRNA及蛋白表达水平在CD及对照组患者肠黏膜活检组织中的变化
        3.5 α-SMA蛋白表达水平在CD及对照组患者肠黏膜活检组织中的变化
        3.6 IL-17AmRNA转录水平与EMT指标的相关性
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第二部分：IL-17A诱导肠上皮细胞发生EMT
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞株
            2.1.2 实验仪器
            2.1.3 主要试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞干预
            2.2.3 细胞形态观察
            2.2.4 免疫荧光观察细胞EMT相关指标的变化
            2.2.5 Real-timePCR反应测定ColIα1mRNA的转录水平
            2.2.6 WesternBlot检测EMT相关蛋白及纤维化蛋白的表达
        2.3 统计学处理
    3 实验结果
        3.1 IL-17A对IEC-6细胞形态的影响
        3.2 免疫荧光观察IL-17A对E-cadherin表达的影响
        3.3 Real-timePCR检测IEC-6细胞经IL-17A刺激后ColIα1的mRNA水平
        3.4 Westernblot检测IL-17A对EMT及纤维化指标的影响
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第三部分：阻断IL-17A改善实验性结肠炎肠纤维化
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 药品与试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验对象与分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 模型建立与实验分组
            2.2.3 标本的采集与处理
            2.2.4 观察指标及检测方法
            2.2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 各组小鼠一般状况、疾病活动指数(DAI)及存活率
        3.2 各组小鼠结肠组织大体形态改变
        3.3 各组小鼠结肠组织的病理表现
        3.4 各组小鼠结肠组织Masson染色镜下表现
        3.5 各组小鼠结肠组织羟脯氨酸含量
        3.6 各组小鼠EMT相关蛋白及纤维化蛋白的表达情况
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间所取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4036824