CD38基因敲除对酒精引起的小鼠原代肝细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2025-03-29 22:39

　　研究背景与研究目的:酒精性肝病是由长期大量饮酒造成的一类代谢性疾病,其主要病变包括脂肪堆积,纤维化和肝硬化等。据统计,至少60%的肝脏疾病相关死亡是由于过量饮酒造成的,目前认为氧化应激是造成酒精性肝病发生和发展的主要原因,抗氧化应激被认为是最直接和最有效的酒精性肝病治疗策略。我们实验室前期研究发现,CD38基因缺失的小鼠胚胎成纤维细胞对H₂O₂和缺氧复氧诱导的氧化应激损伤具有显著的保护作用,同时CD38干扰可以改善由心脏脂质超载诱导的氧化应激损伤,然而CD38是否可以通过影响氧化应激影响酒精在肝损伤中的作用尚无文献报道。本课题拟在体外制备酒精诱导的肝细胞损伤模型,利用原代CD38基因敲除肝细胞研究其在酒精引起肝细胞氧化应激损伤中的作用及其具体机制,从而为酒精性肝病的防治提供新的作用靶点与研究思路。实验方法:1.肝原代细胞的提取与酒精诱导的肝细胞损伤模型的制备:1)通过在体灌流法分离培养6-8周龄C57BL/6小鼠原代肝细胞;2)梯度浓度酒精处理体外培养的原代肝细胞10小时,用DCFH-DA荧光探针标记细胞活性氧（reactive oxygen ...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 前言
    1.1 酒精引起的肝损伤研究意义
    1.2 酒精吸收与代谢
    1.3 酒精代谢产生氧化应激损伤
    1.4 ALDH2 与氧化应激
    1.5 CD38 与氧化应激
第2章 酒精对CD38 表达的影响及细胞模型的建立
    2.1 引言
    2.2 实验材料和方法
        2.2.1 实验材料试剂
        2.2.2 CD38 开展肝细胞特异性敲除小鼠获取
        2.2.3 原代肝脏细胞分离培养
        2.2.4 蛋白印迹
        2.2.5 RNA的提取
        2.2.6 RNA反转录
        2.2.7 实时荧光定量PCR
        2.2.8 酒精引起的原代肝细胞损伤模型的制备
        2.2.9 倒置荧光显微镜检测贴壁细胞ROS
    2.3 结果
        2.3.1 酒精诱导的原代肝细胞氧化应激模型建立
        2.3.2 酒精对原代肝细胞CD38 表达量影响
    2.4 讨论
第3章 CD38 基因敲除减轻酒精诱导的原代肝细胞氧化应激损伤
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 流式细胞仪检测细胞ROS
        3.2.2 丙二醛检测试剂盒检测培养细胞MDA含量
        3.2.3 BCA法测定细胞蛋白浓度
        3.2.4 线粒体膜电位检测
    3.3 实验结果
        3.3.1 原代肝细胞CD38 基因敲除效率的鉴定
        3.3.2 CD38 基因敲除减轻酒精诱导ROS损伤
        3.3.3 CD38 基因敲除减轻酒精诱导原代肝细胞的MDA累积
        3.3.4 CD38 基因敲除减轻酒精诱导原代肝细胞的线粒体损伤
    3.4 讨论
第4章 CD38 基因敲除通过增加ALDH2 表达减轻酒精诱导的细胞损伤
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 超氧化物歧化酶(SOD2)活性检测
        4.2.2 Western blot
        4.2.3 RNA的提取
        4.2.4 Real-timePCR
        4.2.5 CD38 基因过表达的原代细胞构建
    4.3 实验结果
        4.3.1 CD38 基因敲除抑制SOD2 和促氧化应激蛋白NOX2 的表达
        4.3.2 CD38 基因敲除增加原代肝细胞抗氧化应激SOD活性
        4.3.3 CD38 基因敲除促进原代肝细胞ALDH2 mRNA表达
        4.3.4 CD38 基因过表达降低原代肝细胞ALDH2mRNA表达
    4.4 讨论
        4.4.1 CD38 基因敲除抑制NOX2 表达及提高SOD活性减轻酒精诱导的肝细胞损伤
        4.4.2 CD38 基因敲除促进ALDH2 表达减轻酒精诱导的肝细胞损伤
第5章 结论
参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢
综述
    参考文献



本文编号：4037757